1.8.4. Xác định hàm lượng β-glucan tổng số và hoạt tính enzyme invertase
Xác định hàm lượng β-glucan tổng số: thông qua phương pháp PSA, sau đó so sánh với chất chuẩn (Lentinan, β-1,3-D-glucan).
Xác định hoạt tính enzyme invertase:
Phương pháp xác định hàm lượng đường khử bằng phương pháp DNS
Nguyên tắc: Acid 3,5-dinitrosalicylic (DNSA, acid 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoic) là một hợp chất thơm phản ứng với đường khử và các phân tử khử khác để tạo thành acid 3-amino-5-nitrosalicylic, hấp thụ ánh sáng mạnh ở bước sóng 540 nm (trong trường hợp glucose). Phương pháp này kiểm tra sự hiện diện của nhóm cacbonyl tự do (C=O), được gọi là đường khử. Điều này liên quan đến quá trình oxy hóa nhóm chức aldehyde có trong, ví dụ, glucose và nhóm chức xeton trong fructose. Đồng thời, acid 3,5-dinitrosalicylic (DNS) bị khử thành acid 3-amino, 5-nitrosalicylic trong điều kiện kiềm.
Phương pháp thực hiện:
Tất cả các ống nghiệm sau khi pha đúng nồng độ (0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2), 2 mL thuốc thử DNS thêm vào 1 mL chất chuẩn và vortex đều. Tiến hành đun cách thủy trong 5 phút, để nguội. Đo mật độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm. Chú ý đo mẫu có nồng độ thấp đến cao. Ta có phương trình tuyến tính.
Tương tự, lấy 1 mL mẫu thí nghiệm cho vào ống nghiệm, 2 mL thuốc thử DNS, vortex đều. Tiến hnahf đun cách thủy trong 5 phút, để nguội. Đo mật độ hấp thụ ở bước sóng 540 nm.
Dựa vào phương trình đường chuẩn glucose để tính hàm lượng đường khử trong mẫu.
Công thức tính hàm lượng đường khử:
N=X x n (g/L)
Trong đó:
N: Hàm lượng đường khử.
X: Hàm lượng glucose mẫu dựa vào phương trình đường chuẩn.
n: Hệ số pha loãng.
Xác định hoạt tính của enzyme invertase:
Cho vào erlen 4 mL dung dịch đệm acetate pH 4,5; 4,6 mL nước cất và 0,4 mL dịch chưa enzyme. Thêm vào 1 mL dung dịch đường sucrose nồng độ 20 g/L. Cho phản ứng enzyme xảy ra chính xác trong 15 phút. Sau đó xác định lượng đường khử tạo thành bằng phương pháp DNS, từ đó suy ra số mol sucrose đã bị phân hủy.
Một đơn vị hoạt tính invertase là lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1 micromol đường sucrose trong 1 phút ở điều kiện pH 4,5 và nhiệt độ 30oC (Lê Văn Việt Mẫn, 2006).
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |
