Báo cáo tổng kếT ĐỀ TÀi nghiên cứu khoa học của sinh viên nghiên cứu tách chiếT Β-glucan
Phương pháp xác định đường tổng bằng phương pháp PSA
tải về 1.19 Mb.
|
Lê Xuân Lộc - Thuyết minh NCKH SV 2021
- Điều hướng trang này:
- Mục đích
| Phương pháp xác định đường tổng bằng phương pháp PSA
Nguyên tắc: Carbohydrate (đường đơn, oligosaccharid và các dẫn xuất của chúng) phản ứng khi có mặt acid mạnh và nhiệt để tạo ra các dẫn xuất furan ngưng tụ với phenol để tạo thành các hợp chất vàng-vàng bền vững có thể đo được bằng quang phổ. Đối với các sản phẩm chứa nhiều xylose (một loại đường pentose), chẳng hạn như cám lúa mì hoặc cám ngô, xyloza nên được sử dụng để xây dựng đường chuẩn cho phép thử và đo độ hấp thụ ở bước sóng 480 nm. Đối với các sản phẩm có nhiều đường hexose, người ta thường sử dụng glucose để tạo đường chuẩn và đo độ hấp thụ ở bước sóng 490 nm. Thực hiện: Tất cả ống sau khi pha đúng nồng độ (0, 10, 20, 30, 40, 60, 80 µg/mL), thêm 0,05 mL phenol 80% hoặc 1mL phenol 5% vào 2 mL chất chuẩn và vortex đều. Thêm 5 mL H2SO4 trong khoảng thời gian thích hợp. Vortex đều và để nguội đến nhiệt độ phòng (có thể làm mát bằng cách đặt trong water bath 25oC trong 10 phút). Đo mật độ hấp thụ ở bước sóng 490 nm. Chú ý đo mẫu có nồng độ thấp đến cao. Ta có phương trình tuyến tính. Tương tự, ta lấy 2 mL mẫu thí nhiệm cho vào ống nghiệm, thêm 0,05 mL phenol 80% hoặc 1 mL phenol 5% vào 2 mL chất chuẩn và vortex đều. Thêm 5 mL H2SO4 trong khoảng thời gian thích hợp. Vortex đều và để nguội đến nhiệt độ phòng. Đem đo mật độ quang ở bước sóng 490 nm. (Mẫu được pha loãng sao cho mật độ quang đo được trong khoảng đường chuẩn). Mỗi thí nghiệp lập lại 3 lần. 1.8.3. Thử nghiệm tách chiết β-glucan và enzyme invertase từ bã nấm men biaMục đích: tách chiết được β-glucan và enzyme invertase từ bã nấm men bia Phương pháp thực hiện - Phương pháp tách chiết enzyme invertase: bã nấm men bia dạng sệt thu được từ nhà máy bia được đem phối trộn với nước vô khuẩn theo tỉ lệ nấm men/nước là 1/3 (w/w), rồi để lắng trong 1 giờ và gạn bỏ phần nước bên trên. Tiếp tục phối trộn sinh khối nấm men với dung dịch nước muối NaCl (0,5%) theo tỉ lệ 1/3 (w/w). Sau 1 giờ, gạn nước và tiến hành ly tâm (3.000 vòng/phút) để thu nhận sinh khối nấm men. Tiếp theo, sinh khối nấm men được phối trộn với dung dịch đệm để thực hiện quá trình tự phân. Sau quá trình tự phân, mẫu được ly tâm (7.000 vòng/phút) để tách bỏ phần không tan, phần dịch lỏng thu được là chế phẩm invertase thô (Lê Văn Việt Mẫn và ctv., 2006). - Phương pháp tách chiết β-glucan: Phần lắng sau khi ly tâm tiến hành tách chitin và manoprotein ra khỏi thành tế bào bằng cách sử dụng NaOH 3,3%. Ủ với NaOH 3,3% trong 18 h ở 75oC, sau đó để nguội đến 30-40ºC, bổ sung nước cất, lắc đều và ly tâm lấy phần cặn ở 4.000 vòng/phút trong 10 phút. Chiết phần cặn với 700 mL NaOH 3,3%, khuấy đều ở 75ºC trong 1 giờ. Sau đó hạ nhiệt độ xuống nhiệt độ phòng, thêm nước cất với tỉ lệ 1:1 (v/v). Ly tâm 4.000 vòng/phút trong 10 phút thu phần cặn (Phạm Việt Cường, 2005). - Thu nhận β-glucan tổng số: Dùng dung dịch NaOH có nồng độ thích hợp để thu nhận β-glucan tổng số. Bổ sung dung dịch NaOH và khuấy đều ở 75ºC trong 2 giờ, sau đó để nguội và ly tâm ở 2.000 vòng/phút trong 10 phút. Rửa 2 lần bằng cồn tuyệt đối, trộn đều trong 10 phút sau đó ly tâm 2.000 vòng/phút trong 10 phút, lặp lại 2 lần. Rửa tiếp bằng dietylete trong 10-15 phút, ly tâm tiếp 3.000 vòng /phút thu cặn và làm khô ở nhiệt độ phòng. Cân và sử dụng phương pháp PSA xác định độ tinh sạch của sản phẩm β-glucan thu được. tải về 1.19 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|