TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiêN
Bảng 3.4. Khả năng phát hiện vi khuẩn và các yếu tố độc lực khi thay đổi điều kiện quy trình PCR đa mồi
tải về 0.74 Mb.
|
- Điều hướng trang này:
- Hình 3.3. PCR đa mồi với các điều kiện phản ứng tối ưu phát hiện trực tiếp S. suis trong bệnh phẩm
- Bảng 3.5. Thành phần tham gia phản ứng PCR đa mồi được khảo sát
- Hình 3.4. Thử nghiệm hàm lượng các mồi với nồng độ mỗi mồi là 20pmol/µl
Bảng 3.4. Khả năng phát hiện vi khuẩn và các yếu tố độc lực khi thay đổi điều kiện quy trình PCR đa mồi
Sau quá trình thử nghiệm, nhóm nghiên cứu đã lựa chọn được chương trình PCR có 2 chu trình nhiệt độ với nhiệt độ biến tính, thời gian biến tính và các chu kỳ thích hợp trong từng chu trình nhiệt cũng như nhiệt độ bắt cặp và các khoảng thời gian thích hợp trong mỗi bước nhiệt. Khả năng phát hiện khi ứng dụng quy trình đạt ≥ 10 vi khuẩn (copy)/phản ứng. Cụ thể:
Sản phẩm đích rõ nét, không có hiện tượng cạnh tranh. Kết quả được minh họa ở hình 3.3
3.1.4. Tối ưu hóa các thành phần tham gia phản ứng PCR đa mồi phát hiện vi khuẩn S. suis và một số yếu tố độc lực phổ biếnBảng 3.5. Thành phần tham gia phản ứng PCR đa mồi được khảo sát
Bảng 3.5 cho thấy hàng lượng Taqpolymerase >1,5u/pư, hàm lượng dNTPs = 200 µM, nồng độ MgCl2 > 1,5mM, tỉ lệ các mồi và hàm lượng tế bào đích phù hợp sẽ ảnh hưởng tốt đến hiệu quả phát hiện S.suis của quy trình PCR đa mồi được xây dựng. 3.1.4.1. Tối ưu hóa nồng độ mồi tham gia phản ứng
bp 
1000 300 500 
Hình 3.4. Thử nghiệm hàm lượng các mồi với nồng độ mỗi mồi là 20pmol/µlM: thang chuẩn DNA cỡ 100bp; C (-): chứng âm Nồng độ vi khuẩn từ 104vk/µl đến 10 vk/µl Hình 3.4 cho thấy, ở nồng độ 104vk/µl và 103vk/µl, cả 3 sản phẩm DNA của 3 cặp mồi cps 2J, 16S rDNA và Sly đều biểu hiện, tuy nhiên vạch sản phẩm của cặp mồi cps 2J biểu hiện yếu hơn sản phẩm của 2 cặp mồi còn lại. Ở nồng độ 102 và 10 vk/µl, sản phẩm của cặp mồi cps 2J không biểu hiện, chỉ xuất hiện sản phẩm của 2 cặp mồi còn lại. Điều này có thể do sức cạnh tranh của cặp mồi cps 2J yếu hơn khi hàm lượng DNA của vi khuẩn trong phản ứng ở nồng độ thấp. Vì vậy để khắc phục thực trạng này, chúng ta có thể giảm hàm lượng của 2 mồi mạnh 16S rDNA, Sly và tăng nồng độ của mồi cps2J.
Каталог: files -> ChuaChuyenDoi ChuaChuyenDoi -> ĐẠi học quốc gia hà NỘi trưỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Thị Hương XÂy dựng quy trình quản lý CÁc công trìNH ChuaChuyenDoi -> TS. NguyÔn Lai Thµnh ChuaChuyenDoi -> Luận văn Cao học Người hướng dẫn: ts. Nguyễn Thị Hồng Vân ChuaChuyenDoi -> 1 Một số vấn đề cơ bản về đất đai và sử dụng đất 05 1 Đất đai 05 ChuaChuyenDoi -> Lê Thị Phương XÂy dựng cơ SỞ DỮ liệu sinh học phân tử trong nhận dạng các loàI ĐỘng vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật và nghiên cứU ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Hà Linh ChuaChuyenDoi -> ĐÁnh giá Đa dạng di truyền một số MẪu giống lúa thu thập tại làO ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiêN ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Văn Cường tải về 0.74 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
