Chƣơng 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Khảo sát các điều kiện sắc ký
3.1.1. Chọn bƣớc sóng của detector
Từ quang phổ, chúng tôi thấy rằng các chất hấp thu cực đại tại bước sóng không
khác nhau nhiều và nằm trong khoảng 260-275nm. Riêng MTD hấp thụ cực đại
tại320nm . Vì vậy, để có bước sóng chung cho 5 chất chúng tôi chọn bước sóng 270nm
cho các thí nghiệm tiếp theo. Đồng thời để định lượng chất MTD nhạy hơn, Detecto để 2
kênh 320nm và 270nm.
3.1.2. Thăm dò khả năng tách của các Sulfamit trên cột RP-C18
Thời gian lưu được tính từ lúc nạp mẫu vào cột tách sắc ký cho đến lúc chất tan
được rửa giải ra khỏi cột ở điểm có nồng độ cực đại.
Bảng 3.2: Thời gian lưu và thứ tự ra pic của các chất phân tích
TT
Thời gian lưu t
Ri
(phút)
Chất phân tích
1
3,30
SGU
2
4,48
MTD
3
8,49
SMP
4
13,23
SDO
5
15,08
SMX
Dựa vào việc khảo sát thời gian lưu đối với các chất phân tích chúng tôi biết được
thời gian lưu cụ thể của từng chất làm cơ sở cho quá trình phát hiện định tính rồi định
lượng các sulfamit, metronidazole trong các đối tượng nghiên cứu sau này.
3.2. Chọn pha tĩnh
Để nghiên cứu tách và xác định các SAs, MTD đa phần là chất phân cực do đó chủ
yếu các công trình công bố đều sử dụng cột tách chứa chất nhồi pha đảo như RP- C
4
, RP
– C
12
….Cột RP – C
18
với kích thước hạt nhồi 5µm của hãng Sulpenco- Australia được
chọn để tách các chất trên.
3.3. Tối ƣu hoá pha động
3.3.1. Nồng độ đệm axetat của pha động
Các giá trị nồng độ dung dịch đệm được lựa chọn khảo sát trong khoảng 2 – 20mM.
Khi thay đổi nồng độ dung dịch đệm thì hệ số dung tích của nó hầu như không thay đổi.
Hơn nữa, nhìn trên sắc đồ thì nồng độ đệm không có sự ảnh hưởng rõ rệt tới khả năng
tách và thời gian xuất hiện pic, diện tích pic sắc ký. Tại một nồng độ dung dịch đệm nhất
định trong pha động hệ số dung tích của các chất phân tích có sự khác nhau rõ rệt, như
vậy đã có sự tách tốt giữa các chất trong quá trình sắc ký .Với khoảng nồng độ đệm tiến
hành khảo sát thì pic sắc ký đều rất sắc nét và riêng biệt. Dựa trên những nhận xét đó
nồng độ dung dịch đệm thích hợp trong pha động được lựa chọn là 10mM.
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |
