Phân lập và tuyển chọn VI khuẩn có khả NĂng phân hủy protein và cellulose từ CÁc nguồn rác thải hữu cơ
tải về 0.53 Mb. Chế độ xem pdf
|
- Điều hướng trang này:
- 2.2. Khảo sát định tính và định lượng khả năng phân hủy protein và cellulose của các dòng VK được phân lập
| 2. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU 2.1. Phân lập và tuyển chọn các dòng VK có khả năng phân huỷ rác hữu cơ Các mẫu rác thải hữu cơ được thu từ chợ, các khu vực dân cư, mẫu thức ăn thừa tại các quán ăn, quán cơm trên địa bàn thành phố Cần Thơ với khối lượng mẫu được thu khoảng 10 kg/mẫu rác. Các mẫu rác mang về được loại bỏ các bọc nylon, chai nhựa, kim loại, sau đó rác được trộn đều, xay nhỏ và ủ trong thời gian 5 – 7 ngày, trong điều kiện thoáng khí ở nhiệt độ phòng. Dung dịch rác ủ sau đó được pha loãng đến nồng độ 10 -6 , hút 50 µL ở các nồng độ pha loãng trải lên bề mặt môi trường cellulose với các thành phần của môi trường bao gồm 1 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 1 g K 2 HPO 2 , 0,5 g MgSO 4 , 0,009 g NaCl, 10 g CMC (carboxymethylcellulose), 0,2 g cycloheximide, 20 g agar (môi trường đặc), môi trường được điều chỉnh về pH= 6,8 (Ryckeboer et al., 2002) để phân lập VK có khả năng phân hủy cellulose và môi trường protein (Hà Thanh Toàn và ctv., 2008) có hiệu chỉnh với các thành phần bao gồm 5 g pepton, 3 g beef extract, 1 g yeast extract, 20 g sữa bột tách béo (skim milk) và 20 g agar để phân lập nhóm VK có khả năng phân hủy protein. Các đĩa môi trường được ủ 48 giờ cho nhóm VK có khả năng phân hủy protein và 72 giờ cho nhóm VK có khả năng phân hủy cellulose. Các dòng VK được tách ròng cho đến khi thu được các khuẩn lạc thuần và đồng nhất. 2.2. Khảo sát định tính và định lượng khả năng phân hủy protein và cellulose của các dòng VK được phân lập 2.2.1. Khảo sát định tính khả năng tạo vòng sáng halo trên môi trường chuyên biệt của các dòng VK Các dòng VK sau khi được tách ròng được sử dụng để đánh giá định tính khả năng phân hủy protein và cellulose. Mỗi đĩa môi trường chuyên biệt của protein hoặc của cellulose được cấy 3 khuẩn lạc của cùng 3 dòng VK đã được tách ròng và mỗi dòng VK được thực hiện trên 3 đĩa là 3 lần lặp lại cho mỗi dòng VK. Các đĩa sau khi được cấy VK được ủ ở nhiệt độ phòng. Sau 2 ngày ủ, đối với nhóm VK phân hủy protein đo trực tiếp vòng phân hủy xuất hiện xung quanh khuẩn lạc. Nhóm VK có khả năng phân hủy cellulose, vòng phân hủy được xác định khi nhuộm với thuốc thử Congo red 0,01% (Ariosa et al., 2005). Đường kính khuẩn lạc và đường kính vòng phân hủy được xác định theo phương pháp của Võ Văn Phước Quệ và Cao Ngọc Điệp (2011). 𝑪𝒉ỉ 𝒔ố 𝒑𝒉â𝒏 𝒉ủ𝒚 = 𝑫𝟏 + 𝑫𝟐 𝑫𝟏 Trong đó, D1 (mm) là đường kính khuẩn lạc. D2 (mm) là đường kính tạo bởi vòng sáng. 2.2.2. Khảo sát định lượng khả năng phân hủy rác thải hữu cơ của các dòng VK được tuyển chọn Chuẩn bị vật liệu: Nguồn VK: Mỗi 10 dòng VK có khả năng phân hủy protein là 10 dòng VK có khả năng phân hủy celulose có triển vọng từ kết quả định tính được sử dụng để đánh giá khả năng phân hủy vật liệu hữu cơ (VLHC). Các dòng VK được nhân nuôi trong môi trường chuyên biệt và khi các khuẩn lạc xuất hiện trên môi trường và tiến hành thu các khuẩn lạc đơn của mỗi dòng VK và chyển vào chai thủy tinh (250 mL) chứa 100 mL môi trường chuyên biệt cho từng dòng VK. Sau đó, mật số VK được điều chỉnh về mật số khuẩn lạc đạt 10 8 CFU/mL. Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 57, Số Chuyên đề Môi trường và Biến đổi khí hậu (2021)(1): 34-41 36 Các mẫu VLHC bao gồm mẫu thịt heo vụn và mẫu cá vụn để xác định khả năng phân hủy protein và mẫu rau cải bỏ từ các chợ trên địa bàn quận Ninh Kiều được thu về xác định khả năng phân hủy cellulose của các dòng VK. Mẫu thịt heo vụn được thu từ chợ mang về xay nhuyễn, cân khối lượng lần lượt là 1 g, 2 g, 3 g và được bổ sung 9 mL, 8 mL và 7 mL nước cất vô trùng vào ống nghiệm để đạt thể tích sau cùng là 10 mL, tương ứng với khối lượng dung dịch thịt sau khi pha loãng là 10%, 20% và 30%. Mẫu cá vụn được xay nhuyễn và cân 10 g cho vào bình tam giác 150 mL. Mẫu rau cải vụn được thu gom tại các chợ lúc vừa vứt bỏ còn tươi, đem về băm nhỏ cân 20 g cho vào hộp nhựa (300 ml). tải về 0.53 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|