Microsoft Word tcsh14-027-Nguyen Duc Thanh Dzung edited doc
Các kỹ thuật chỉ thị DNA không sử dụng PCR
tải về 0.52 Mb. Chế độ xem pdf
|
| Các kỹ thuật chỉ thị DNA không sử dụng PCR
Kỹ thuật đa hình độ dài đoạn cắt hạn chế (RFLP) Trong kỹ thuật đa hình độ dài đoạn cắt hạn chế (Restriction Fragment Length
Polymorphism-RFLP), đa hình DNA được xác định bằng cách lai đoạn dò DNA (DNA probe) đánh dấu với DNA sau khi cắt hạn chế bằng enzyme cắt hạn chế và được thấm truyền lên màng lai bằng phương pháp Southern. Kết quả là tạo ra hình ảnh các phân đoạn DNA khác nhau. Các hình ảnh phân đoạn DNA khác nhau này được tạo nên do sự thay thế, thêm vào hay bớt đi của các nucleotide hoặc do đa hình nucleotide đơn. Kỹ thuật RFLP được tiến hành theo các bước: cắt DNA bằng một hoặc vài enzyme cắt hạn chế; các phân đoạn DNA sau đó được phân tách trên gel agarose và thấm truyền lên màng lai. Việc xác định các phân đoạn DNA được tiến hành bằng lai các phân đoạn DNA này với đoạn dò được đánh dấu huỳnh quang hoặc phóng xạ để có thể phát hiện bằng phản ứng huỳnh quang hoặc phim chụp phóng xạ (hình 1).
cắt hạn chế, các phân đoạn DNA sau đó được phân tách bằng điện di trên gel agarose, rồi được thấm truyền bằng phương pháp Southern lên màng nylon và được lai với các đoạn dò được đánh dấu bằng phóng xạ hoặc huỳnh quang, cuối cùng là hiện trên phim hoặc nhuộm bằng chất hiện mầu
Các kỹ thuật chỉ thị DNA
269 Các chỉ thị RFLP có mức đa hình cao, đồng trội (nên có thể phân biệt được các cá thể dị hợp tử và đồng hợp tử) và khả năng lặp lại cao. Kỹ thuất RFLP cũng cho phép phân tích đồng thời nhiều mẫu. Tuy nhiên kỹ thuật này không được dùng rộng rãi vì một số hạn chế như: cần nhiều DNA chất lượng cao, phải phát triển thư viện đoạn dò cho từng loài, cần thông tin về trình tự để tạo đoạn dò, không thuận tiện cho việc tự động hóa, mức độ đa hình và số lượng locus trên lần phân tích thấp, đòi hỏi nhiều thời gian, tốn kém. Trong những thập niên 80 và 90 của thế kỷ trước, kỹ thuật RFLP được sử dụng trong lập bản đồ genome [54, 96], xác định giống [82]. RFLP được dùng trong nghiên cứu quan hệ giữa các nhóm phân loại gần [119], đa dạng di truyền [42], trong lai tạo và chuyển gen vào cá thể khác (introgression) bao gồm cả trôi gen giữa cây trồng và cỏ dại [36].
tải về 0.52 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|