Microsoft Word 02-cn-le ho khanh hy(8-15)
Thử nghiệm đặc tính kháng khuẩn của
tải về 2.16 Mb. Chế độ xem pdf
|
| 2.4 Thử nghiệm đặc tính kháng khuẩn của
hạt nanochitosan tổng hợp 2.4.1 Nuôi tăng sinh vi khuẩn Môi trường nuôi tăng sinh vi khuẩn Salmonella typhi: Dung dịch peptone đệm (Sadovski, 1977). Thí nghiệm nuôi tăng sinh vi khuẩn: Vi khuẩn được nuôi cấy sinh khối trong ống nghiệm chứa môi trường peptone đệm ở điều kiện 37 °C, với tốc độ lắc 120 vòng/phút trong 24 h.
Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Phần A: Khoa học Tự nhiên, Công nghệ và Môi trường: 37 (2015): 8-15
10 Xác định mật độ vi khuẩn: Dịch vi khuẩn sau khi nuôi cấy được đo độ đục bằng UV spectrophotometer ở bước sóng 625 nm, với giá trị OD trong khoảng 0,08-0,1. Mật độ vi khuẩn trong dung dịch nuôi được tính toán dựa vào độ đục chuẩn 0,5 McFarland (McFarland và ctv, 1907) tương ứng với mật độ 1,5x10 8 vi khuẩn/ml. Huyền phù dịch vi khuẩn sau khi pha loãng có số lượng vi khuẩn 10 8 vi khuẩn/ml được sử dụng cho thí nghiệm tiếp theo. 2.4.2 Thí nghiệm khả năng ức chế vi khuẩn Salmonella typhi của chitosan và nanochitosan (Andrews, 2001) Trong thí nghiệm này, mỗi ống nghiệm chứa 5,0 mL môi trường dung dịch peptone đệm được hấp khử trùng trong 15 phút ở 121°C, sau đó được để nguội về nhiệt độ phòng. Dãy thí nghiệm 1: 5 mg chitosan hoặc 5 mg nanochitosan được hòa tan trong 5 ml dung dịch acid acetic 0.25 % sao cho nồng độ của dung dịch chứa chitosan hay nanochitosan là 1 mg/ml. Chitosan được hòa tan hoàn toàn trong dung dịch, trong khi đó nanochitosan không tan và được lắc đều để các hạt phân tán tốt trong dung dịch trước khi cho vào môi trường. Dung dịch đối chứng là dung dịch acid acetic 0,25 %. Giá trị pH của môi trường có chứa dịch đối chứng là 4,90. Lô thí nghiệm được lặp lại 2 lần. Dãy thí nghiệm 2: 5 mg chitosan hoặc 5 mg nanochitosan được hòa tan trong 5 ml dung dịch acid acetic 0,0625 % sao cho nồng độ của dung dịch chứa chitosan hay nanochitosan là 1 mg/ml. Dung dịch đối chứng là dung dịch acid acetic 0,0625 %. Giá trị pH của môi trường đối chứng là 5,35. Lô thí nghiệm tương tự cũng được lặp lại 2 lần.
Quá trình được tiến hành như sau: Hút 5 ml mỗi dung dịch chitosan/nanochitosan (nồng độ 1 mg/ml) vào ống nghiệm chứa môi trường nuôi đã được chuẩn bị sẵn, lắc đều và tiếp tục hút 5 ml dung dịch ống trước đó vào ống nghiệm tiếp theo. Nồng độ cuối cùng của dung dịch chitosan/nanochitosan lần lượt là 0,5; 0,25; 0,125 mg/ml. Ngoài ra, các ống nghiệm chứa môi trường có dung dịch acid acetic được sử dụng làm đối chứng. Sau đó, dùng micropipet hút 50 µL của dung dịch huyền phù vi khuẩn có số lượng 10 8 vi khuẩn/ml cho vào từng ống nghiệm chứa các nồng độ đã chuẩn bị như trên. Các ống nghiệm được lắc đều và nuôi trong bồn ủ nhiệt với nhiệt độ 37°C, tốc độ lắc 120 vòng/phút trong 24 giờ. Sau 24 h, dung dịch vi khuẩn ở các ống nghiệm được cấy trên đĩa thạch sử dụng môi trường nuôi cấy đặc hiệu cho vi khuẩn Salmonella typhi là Xylose lysine deoxycholate (XLD) agar (Nye và ctv, 2002). Các đĩa thạch sau đó được ủ ở 37 °C và sự phát triển của vi khuẩn được quan sát sau 24 h để xác định khả năng kháng khuẩn của các chất nghiên cứu. tải về 2.16 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|