Giới hạn phát hiện (LOD); Giới hạn định lượng (LOQ)

Giới hạn phát hiện được xem là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích còn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa với tín hiệu của mẫu trắng hay tín hiệu nền. Dựa vào đường chuẩn:

LOD = 3.S_y/B

Giới hạn định lượng được xem là nồng độ thấp nhất (x_Q) của chất phân tích mà hệ thống phân tích định lượng được với tín hiệu phân tích (y_Q) khác có ý nghĩa định lượng với tín hiệu của mẫu trắng hay tín hiệu nền.

Dựa vào đường chuẩn:

LOQ = 10.S_y/B

Trong đó: B là hệ số góc trong phương trình hồi quy

S_y là độ lệch chuẩn của mẫu trắng, cũng được xác định theo phương trình hồi quy. Kết quả được chỉ ra trong bảng 3.9:

Theo như kết quả thu được từ bảng tính toán dựa vào đường chuẩn và phương pháp đo trực tiếp nhận thấy LOQ ≈ 3×LOD, kết quả này hoàn toàn phù hợp với lý thuyết xác suất thống kê về giới hạn định lượng.

Dựa vào sắc đồ chúng ta có thể nhận thấy rằng nồng độ 0,01ppm vẫn có khả năng phân biệt được pic sắc ký của chất phân tích với tín hiệu đường nền.

Để đánh giá sai số của phép đo, chọn các mẫu phân tích có nồng độ nằm trong khoảng tuyến tính tại điểm đầu, điểm giữa và điểm cuối của khoảng tuyến tính đã khảo sát. Chúng tôi tiến hành chuẩn bị ba mẫu chuẩn có nồng độ 0,08; 0,4 và 0,8ppm với điều kiện tương tự như điều kiện khảo sát khoảng tuyến tính. Mỗi mẫu tiến hành phân tích 5 lần, sai số được tiến hành theo công thức sau:

%X = (S_i – S_t) *100/S_t

Trong đó: S_i là diện tích pic tính từ đường chuẩn

S_t là diện tích pic đo được trong sắc đồ

Một phương pháp phân tích tốt ngoài yêu cầu về độ đúng của phương pháp người ta còn chú ý tới độ lặp lại của phương pháp. Nhằm đánh giá độ lặp lại của phép đo chúng tôi tiến hành khảo sát độ lặp lại của 3 mẫu trên (0,08; 0,4 và 0,8ppm). Dựa vào các số liệu thực nghiệm đánh giá độ lặp lại của phép đo dựa vào phương sai và độ lệch chuẩn tương đối:

Độ lệch chuẩn được tính theo công thức:

Hệ số biến thiên:

C

Trong đó: S_i - Giá trị của tín hiệu phân tích ở lần đo thứ i (mAU.s)

S_tb – Giá trị tín hiệu trung bình của i lần đo.(mAU.s)

n - số thí nghiệm lặp

s - độ lệch chuẩn

CV - hệ số biến thiên của phép đo.

Qua bảng kết quả, phân tích và tính toán trên nhận thấy đối với dải nồng độ cao thì sai số nhỏ đối với các mẫu phân tích có nồng độ nhỏ thì sai số lớn. Theo lý thuyết thống kê thì sai số cho phép nằm trong khoảng 15%, như vậy với khoảng nồng độ khảo sát thì độ chính xác của phép đo này được tin cậy.

Trên cơ sở nghiên cứu những tài liệu liên quan đã công bố chúng tôi đã chọn được một phương pháp thích hợp để xác định hiệu suất thu hồi như sau:

1. Thêm 2.5g Na₂SO₄ khan

2. Thêm 10ml ACN

3. Lắc chiết 30 phút

4. Li tâm 10 phút (5000vòng/ phút)

Cặn

2. Siêu âm 5 phút

3. Li tâm 10 phút

Cặn

1.Thêm10ml ACN

2. Siêu âm 5 phút

3. Li tâm 10 phút

Cặn

Dung dịch Loại bỏ

Làm sạch bằng cột chiết pha rắn C18 1. Bão hoà cột: 10ml MeOH, 10 ml H₂O

2. Nạp mẫu

3. Rửa: 10ml H₂O

4. Rửa giải: 10ml MeOH

10ml dung dịch SAs trong MeOH

1. Cô cạn dung dịch bằng dòng khí N₂ ở 50^oC

2. Định mức thành 5 ml bằng pha động chạy HPLC

3. Lọc qua cartridge 0,2 m
Bơm vào hệ thống HPLC
Hình 3.19: Sơ đồ xử lý mẫu tôm
Với quy trình xử lý mẫu trên thêm lần lượt lượng chính xác các chất phân tích vào các mẫu tôm và xử lý. Với mỗi một nồng độ chất thêm vào mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình.

Các kết quả nghiên cứu được trình bày trong hình 3.20, bảng 3.13 và bảng 3.14:

1. 
   (b)
   

Ct(ppm) pic(mm)	0	0,2	0,4
SGU	9610	30104	51859
MTD	0	24056	43824
SMP	0	25742	50795
SDO	0	23144	49734
SMX	0	21975	48753

Từ kết quả trên, hiệu suất thu hồi các chất ở các nồng độ được chỉ ra trong bảng 3.13. Hiệu suất thu hồi được xác định như sau:

H = (C_x/C_t)* 100%

Trong đó: C_t - lượng chất biết trước thêm vào

C_x - lượng chất xác định được bằng phương pháp thêm

Với

S_x – Diện tích pic khi thêm lượng C_x vào mẫu

S_o – Diện tích pic khi thêm của mẫu khi chưa thêm chất phân tích

A, B - các hệ số phương trình đường chuẩn của chất phân tích

Bảng 3.14: Kết quả xác định hiệu suất thu hồi các chất phân tích

Các Sas	Ct (ppm)	Cx(ppm)	H%
SGU	0,200	0,165	82,50
	0,400	0,349	87,3
MTD	0,200	0,151	75,5
	0,400	0,31	77,7
SMP	0,200	0,167	83,5
	0,400	0,361	90,3
SDO	0,200	0,146	72,9
	0,400	0,343	85,8
SMX	0,200	0,142	71,0
	0,400	0,352	88,1

Như vậy trong khoảng nồng độ 0,2 – 0,4ppm, hiệu suất thu hồi metronidazole và các chất kháng khuẩn SAs đạt từ 71 – 90 %, hiệu suất thu hồi như vậy là đạt yêu cầu.

Các mẫu tôm (bỏ đầu, vỏ, chân, đuôi) chỉ lấy phần thịt, sau đó đông khô và được xử lý theo sơ đồ 3.19. Sau khi được dung dịch cuối cùng tiến hành phân tích theo phương pháp thêm chuẩn.

Xây dựng đồ thị biểu diễn diện tích pic theo nồng độ chất thêm.

• 
  Nồng độ chất phân tích trong mẫu C_x được tính theo công thức:
  

• 
  Khoảng tin cậy của nồng độ chất phân tích trong mẫu là:
  

Trong đó:

C­_x : Nồng độ chất phân tích có trong dung dịch bơm vào cột tách

a,b là hệ số trong phương trình hồi qui

S_a, S_b : sai số của hệ số trong phương trình hồi qui

S_x là sai số nồng độ xác định theo phương pháp thêm chuẩn

Khối lượng chất phân tích có trong a(g) mẫu cân đông khô ban đầu là :

m_cpt = V*C_x*F*10^-3(mg)

Khối lượng mẫu thịt tôm tươi : 142,8g

Khối lượng mẫu sau khi đông khô : 32,9g

Lượng nước có trong mẫu : 77%

Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình.

Kết quả phân tích như sau:

Ta có phương trình hồi quy:

Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm

Khối lượng mẫu thịt tươi : 150,1g

Khối lượng mẫu sau khi đông khô : 30,5g

Lượng nước có trong mẫu :79,7%

Ta có phương trình hồi quy:

Hình 3.23: Đường chuẩn SGU trong mẫu tôm chân trắng khi phân tích thêm chuẩn	Hình 3.24: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong mẫu tôm chân trắng

Khối lượng mẫu thịt tôm tươi : 123,6g

Khối lượng mẫu sau khi đông khô: 37,4g

Lượng nước có trong mẫu : 69,7%

Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình.

Kết quả phân tích như sau:

Ta có phương trình hồi quy:

Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm

Khối lượng mẫu tôm tươi : 132,5g

Khối lượng mẫu sau khi đông khô: 28,4g

Lượng nước có trong mẫu : 78,6%

Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình.

Kết quả phân tích như sau:

Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm

Trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, nhằm ứng dụng kỹ thuật phân tích HPLC – UV-Vis để tách, xác định đồng thời metronidazole và một số sulfamit (SGU, SMP, SDO, SMX) trong một số loại tôm, chúng tôi thu được một số kết quả sau đây:

1. 
   Đã chọn được các điều kiện tối ưu cho quá trình sắc ký:
   

• 
  Cột tách RP - C18: 25 cm × 4,6 mm; 5m
  
• 
  Detector UV-VIS: 2 kênh  = 270 nm;  =320nm.Rise time = 0,1 s; Range = 0,01 AUFS
  
• 
  Máy ghi: tốc độ giấy = 1 mm/phút; thế ghi = 10 mV
  
• 
  Thành phần pha động: dung dịch đệm axetat (pH = 4,5) 10mM /aceto-nitril: 80/20 (v/v)
  
• 
  Tốc độ pha động: 1 ml/phút.
  

• 
  Khoảng tuyến tính của các sulfamit: 0,05 – 1,00ppm
  
• 
  Giới hạn phát hiện: 0,012 – 0,029 ppm
  
• 
  Giới hạn định lượng: 0,040 - 0,096 ppm
  
• 
  Hệ số biến thiên: 0,2% – 5% trong khoảng nồng độ 0,08- 0,8ppm.
  

• 
  Chọn quy trình xử lý mẫu thích hợp, hiệu suất thu hồi các chất phân tích trong mẫu tôm đạt từ 71 -90%.
  
• 
  Xác định được dư lượng SGU trong mẫu tôm chân trắng: 0,16 ± 0,01ppm, tôm lớt: 0,21±0,03ppm, tôm rảo:0,12±0,02ppm, tôm sú :0,26±0,02ppm, dư lượng SMP trong tôm sú 0,09 ± 0,01ppm .
  
• 
  Không phát hiện thấy MTD, SDO, SMX, SMP( trừ tôm sú) trong các mẫu tôm.
  

Chúng tôi hy vọng những nghiên cứu trên sẽ góp phần vào việc ứng dụng kỹ thuật HPLC – UV-Vis nói riêng và các kỹ thuật HPLC nói chung để xác định metronidazole và các hợp chất thuộc họ sulfamit trong thực phẩm, nhằm phục vụ đắc lực cho các ngành khoa học và đặc biệt trong lĩnh vực vệ sinh an toàn thực phẩm, giúp bảo vệ sức khoẻ cho con người.

1. 
   Chu Đình Bính, Phạm Luận, Nguyễn Thị Ánh Nguyệt, Nguyễn Phương Thanh (2007), “Xác định dư lượng các chất kháng khuẩn họ sulfamit trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao”, Tạp chí Khoa học và Công nghệ, 45(1B), tr 33 – 41.
   
2. 
   Nguyễn Thị Kim Dung (2004), Xác định sulfonamide trong thuốc bằng phương pháp hấp thụ nguyên tử, Luận văn Thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội.
   
3. 
   Trần Đức Hậu, Nguyễn Đình Hiển, Thái Duy Thìn, Huỳnh Kim Thoa, Nguyễn Văn Thục (2006), Hoá dược tập 2, Bộ môn hoá dược, Đại học Dược, Hà Nội.
   
4. 
   Nguyễn Thị Phương Linh (2006), Xác định gián tiếp hàm lượng sulfamethoxazole trong thuốc bằng phép đo F-AAS, Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội.
   
5. 
   Phạm Luận (1998), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu nâng cao, Đại học Quốc gia Hà Nội.
   
6. 
   Nguyễn Thị Ánh Nguyệt (2007), Nghiên cứu tách và xác định đồng thời một số sulfamit trong thức ăn chăn nuôi và thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao (HPLC), Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội.
   
7. 
   Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung, Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi(2003), Hóa học phân tích- Phần 2(Các phương pháp phân tích công cụ), Đại học Quốc Gia Hà Nội.
   
8. 
   Tạ Thị Thảo (2005), Thống kê trong hoá phân tích, Đại học Quốc gia Hà Nội.
   
9. 
   Tiêu chuẩn ngành (2004), Sulfonamit trong sản phẩm thuỷ sản-Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, 28 TCN 196:2004
   
10. 
    Vũ Cẩm Tú (2009), Xác định các sulfamit trong mẫu Dược phẩm và thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC), Khóa luận tốt nghiệp, Đại học Khoa học Tự nhiên.
    

11. 
    A. V. Pereira, Q. B. Cass(2005), “High- performance liquid chromatography method for the simultaneous determination of sulfamethoxazole and trimethoprim in bovine milk using an on-line clean-up column”, Journal of chromatography B, 826, pp. 139- 146.
    
12. 
    Cheong, C.K., Hajeb, P.Jinap, S. and Ismail-Fitry, M.R(2010), “Sulfonamides determination in chicken meat products from Malaysia’’, International Food Research Journal,17, pp. 885-892.
    
13. 
    
    Каталог: files -> ChuaChuyenDoi
    ChuaChuyenDoi -> ĐẠi học quốc gia hà NỘi trưỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Thị Hương XÂy dựng quy trình quản lý CÁc công trìNH
    ChuaChuyenDoi -> TS. NguyÔn Lai Thµnh
    ChuaChuyenDoi -> Luận văn Cao học Người hướng dẫn: ts. Nguyễn Thị Hồng Vân
    ChuaChuyenDoi -> 1 Một số vấn đề cơ bản về đất đai và sử dụng đất 05 1 Đất đai 05
    ChuaChuyenDoi -> Lê Thị Phương XÂy dựng cơ SỞ DỮ liệu sinh học phân tử trong nhận dạng các loàI ĐỘng vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật và nghiên cứU
    ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Hà Linh
    ChuaChuyenDoi -> ĐÁnh giá Đa dạng di truyền một số MẪu giống lúa thu thập tại làO
    ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiêN
    ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Văn Cường
    
    
    
    tải về 0.65 Mb.
    
    Chia sẻ với bạn bè của bạn: