CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu 2.1.1. Chuột nhắt trắng (Mus muscullus) dòng Swiss
Chuột nhắt trắng Swiss 8 tuần tuổi (trọng lượng 18 - 20g) dùng để gây u, được Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp. Chuột được nuôi trong điều kiện nhiệt độ ổn định 25 – 27ºC, được cung cấp thức ăn và nước uống đầy đủ, đảm bảo khỏe mạnh khi bắt đầu thí nghiệm.
Hình 10. Chuột nhắt trắng Swiss
2.1.2. Một số dòng tế bào ung thư và tế bào lành 2.1.2.1. Các dòng tế bào ung thư
Bảng 1. Một số dòng tế bào ung thư sử dụng trong luận văn và đặc điểm của chúng
Dòng tế bào
|
Sarcoma 180
|
H358
|
H460
|
MCF7
|
HepG2
|
Loại ung thư
|
Ung thư mô liên kết
|
Ung thư phổi
|
Ung thư phổi
|
Ung thư vú
|
Ung thư gan
|
Nguồn gốc
|
Chuột S. Webster
|
Người
|
Người
|
Người
|
Người
|
Hình thái
|
Tế bào mô liên kết
|
Tế bào biểu mô
|
Tế bào biểu mô
|
Tế bào biểu mô
|
Tế bào biểu mô
|
Cách thức phát triển
|
Trôi nổi
|
Bám dính đơn lớp
|
Bám dính đơn lớp
|
Bám dính đơn lớp
|
Bám dính đơn lớp
|
Môi trường nuôi cấy
|
RPMI 1640 + 5-10% FBS + 1% PeniSepto
|
RPMI 1640 + 5-10% FBS + 1% PeniSepto
|
DMEM + 5-10% FBS + 1% PeniSepto
|
DMEM + 5-10% FBS + 1% PeniSepto
|
DMEM + 5-10% FBS + 1% PeniSepto
|
Môi trường bảo quản
|
RPMI 1640 + 50% FBS +10% DMSO
|
RPMI 1640 + 50% FBS +10% DMSO
|
DMEM + 50% FBS + 10% DMSO
|
DMEM +50% FBS + 10% DMSO
|
DMEM +50% FBS + 10% DMSO
|
Các dòng tế bào ung thư trên được cung cấp bởi nhóm Nghiên cứu Ung thư Thực nghiệm, bộ môn Tế bào – Mô – Phôi và Lý sinh, Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội.
2.1.2.2. Tế bào lành Fibroblast
Tế bào lành được sử dụng để thử độc tính của dung dịch hạt nano từ Fe3O4 bọc bằng axit Oleic (H01) và dung dịch hạt nano từ Fe3O4 bọc bằng Copolime poli (axit acrylic – styrene) (E6) là nguyên bào sợi (fibroblast) tách từ phôi thai chuột nhắt trắng (Mus muscullus)
Nguyên bào sợi (Fibroblast) tách từ phôi của chuột được cung cấp bởi nhóm Nghiên cứu về Tế bào gốc, thuộc bộ môn Tế bào – Mô – Phôi và Lý sinh thuộc Khoa Sinh học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội.
2.1.3. Vật liệu nano từ (hay chất lỏng từ)
2 loại vật liệu nano từ được sử dụng là H01 và E6
H01 – dung dịch hạt nano từ Fe3O4 bọc bằng axit Oleic và gắn Curcumin. Hàm lượng sắt là 7.2 mg/ml, 10% Curcumin.
E6 – dung dịch hạt nano từ Fe3O4 bọc bằng Copolime poli (axit acrylic – styrene). Hàm lượng sắt là 10mg/ml.
Hình 11. Ảnh SEM của mẫu E6 – dung dịch hạt nano từ Fe3O4 bọc bằng Copolime poli (axit acrylic – styrene), hạt có kích thước khoảng 100nm
H01 và E6 được cung cấp bởi nhóm nghiên cứu vật liệu Nano Y sinh ở Viện Khoa học Vật liệu, trung tâm Khoa học Tự nhiên và công nghệ Quốc gia.
2.2. Hóa chất và dụng cụ thí nghiệm 2.2.1. Môi trường nuôi cấy -
Môi trường nuôi cấy RPMI 1640 của Gibco BRL (Mỹ)
-
Môi trường nuôi cấy DMEM low/high Glucose của Gibco BRL (Mỹ)
2.2.2. Hóa chất -
FBS: Invitrogen, Mỹ
-
PBS: Invitrogen, Mỹ
-
Trypan Blue 0,4% của Merk
-
Nước cất và nước khử ion đã được khử trùng
-
Penicillin-Streptomycine 100 IU/ml của Invitrogen, Mỹ
-
Trypsine: của Gibco BRL (Mỹ)
-
Thuốc gây mê Thiopental
-
Acid Sulfuric 98% và acid Perchloric 15%
2.2.3. Máy móc thiết bị -
Tủ hood của Esco, Mỹ
-
Tủ ấm CO2 của Shell Lab, Mỹ
-
Kính hiển vi soi ngược Axiovert 40CFL của Carl Zeiss, Đức
-
Kính hiển vi quang học của Carl Zeiss, Đức
-
Pipette aid của Gilson
-
Pipette man 1ml, 200µl, 100µl, 10µl của Gilson
-
Máy li tâm Universal 320
-
Bình ổn nhiệt Gra Operation SS40-1, Đức
-
Máy lọc khí IQAir Cleanroom, Thụy sỹ
-
Nồi hấp ALP,Ltd, Nhật, Model CL-32L
-
Tủ sấy Kottermann, Đức
-
Máy ảnh Canon
-
Máy votex WhirliMixer, Anh
-
Tủ lạnh Hitachi, Nhật
-
Bộ đồ mổ tiểu động vật
-
Máy chụp ảnh cộng hưởng từ 1.5T (Philips)
-
Máy phát từ trường xoay chiều RDO, Model HFI của Mỹ
-
Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Shimazdu của Nhật
2.2.4. Vật tư tiêu hao -
Chai nuôi cấy T25, T75, đĩa Pettri các cỡ, đĩa 24 giếng của Corning (Mỹ).
-
Ống ly tâm 1.5ml, 15ml, 50ml
-
Đầu côn các loại, màng lọc vô khuẩn 0.22µm của Satorius
-
Lam kính, lamen
-
Que gạt tế bào 179693, Mỹ
-
Bơm tiêm 1ml, 5ml, bơm tiêm Insulin 1ml
-
Bình Kenđan, bình nón và bình định mức các loại
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |