Thuyết minh đỀ TÀi nghiên cứu khoa học cấp cơ SỞ
Thử nghiệm tách chiết β-glucan
tải về 374 Kb.
|
Kỳ - Báo cáo NCKH tổng kết 221022
| 4. Thử nghiệm tách chiết β-glucan và enzyme invertase từ bã nấm men bia
Phương pháp tách chiết enzyme invertase: bã nấm men bia dạng sệt thu được từ nhà máy bia được đem phối trộn với nước vô khuẩn theo tỉ lệ nấm men/nước là 1/3 (w/w), rồi để lắng trong 1 giờ và gạn bỏ phần nước bên trên. Tiếp tục phối trộn sinh khối nấm men với dung dịch nước muối NaCl (0,5%) theo tỉ lệ 1/3 (w/w). Sau 1 giờ, gạn nước và tiến hành ly tâm (3.000 vòng/phút) để thu nhận sinh khối nấm men. Tiếp theo, sinh khối nấm men được phối trộn với dung dịch đệm để thực hiện quá trình tự phân. Sau quá trình tự phân, mẫu được ly tâm (7.000 vòng/phút) để tách bỏ phần không tan, phần dịch lỏng thu được là chế phẩm invertase thô (Lê Văn Việt Mẫn và ctv., 2006). Phương pháp tách chiết β-glucan: Phần lắng sau khi ly tâm tiến hành tách chitin và manoprotein ra khỏi thành tế bào bằng cách sử dụng NaOH 3,3%. Ủ với NaOH 3,3% trong 18 h ở 75oC, sau đó để nguội đến 30-40ºC, bổ sung nước cất, lắc đều và ly tâm lấy phần cặn ở 4.000 vòng/phút trong 10 phút. Chiết phần cặn với 700 mL NaOH 3,3%, khuấy đều ở 75ºC trong 1 giờ. Sau đó hạ nhiệt độ xuống nhiệt độ phòng, thêm nước cất với tỉ lệ 1:1 (v/v). Ly tâm 4.000 vòng/phút trong 10 phút thu phần cặn (Phạm Việt Cường, 2005). Thu nhận β-glucan tổng số: Dùng dung dịch NaOH có nồng độ thích hợp để thu nhận β-glucan tổng số. Bổ sung dung dịch NaOH và khuấy đều ở 75ºC trong 2 giờ, sau đó để nguội và ly tâm ở 2.000 vòng/phút trong 10 phút. Rửa 2 lần bằng cồn tuyệt đối, trộn đều trong 10 phút sau đó ly tâm 2.000 vòng/phút trong 10 phút, lặp lại 2 lần. Rửa tiếp bằng dietylete trong 10-15 phút, ly tâm tiếp 3.000 vòng /phút thu cặn và làm khô ở nhiệt độ phòng. Cân và sử dụng phương pháp PSA xác định độ tinh sạch của sản phẩm β-glucan thu được. Thu nhận enzyme invertase tổng số: để nguội và ly tâm ở 2.000 vòng/phút trong 10 phút. Rửa 2 lần bằng cồn tuyệt đối, trộn đều trong 10 phút sau đó ly tâm 2.000 vòng/phút trong 10 phút, lặp lại 2 lần. Rửa tiếp bằng dietylete trong 10-15 phút, ly tâm tiếp 3.000 vòng /phút thu cặn và làm khô ở nhiệt độ phòng. Cân và sử dụng phương pháp PSA xác định độ tinh sạch của sản phẩm enzyme invertase thu được. tải về 374 Kb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|