12. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI
Tách chiết và thu nhận β-glucan và enzyme invertase từ bã nấm men bia.
13. ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI NGHIÊN CỨU
13.1. Đối tượng nghiên cứu
- Bã nấm men từ công ty bia Sài Gòn.
- β-glucan và phương pháp tách chiết.
- Enzyme invertase và phương pháp tách chiết.
13.2. Phạm vi nghiên cứu
- Nội dung nghiên cứu tập trung vào khả năng tách chiết β-glucan và enzyme invertase từ bã nấm men bia.
- Địa điểm thực hiện: Phòng thí nghiệm công nghệ sinh học thực phẩm, Viện NC&PT CNSH.
- Thời gian: 6 tháng, từ tháng 4/2021 đến 9/2021.
|
14. CÁCH TIẾP CẬN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
14.1. Cách tiếp cận
Nghiên cứu lý thuyết - Thử nghiệm - ứng dụng.
14.2. Phương pháp nghiên cứu
- Các phương pháp nuôi cấy nấm men và xác định mật số tế bào, xác định sinh khối nấm men khô bằng phương pháp cân sau sấy.
- Phương pháp tách chiết β-glucan và invertase.
- Phương pháp phân tích và xử lý số liệu: Xử lý số liệu bằng phần mềm Microsoft Excel. Xử lý thống kê bằng phần mềm Statgraphics Centurion XV.
|
15. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU VÀ TIẾN ĐỘ THỰC HIỆN
15.1. Nội dung nghiên cứu
1. Chuẩn bị vật liệu nghiên cứu
Bã men bia S.cerevisea được thu nhận tại nhà máy bia Sài Gòn (Sóc Trăng hoặc Cần Thơ).
2. Xử lý loại các hợp chất đắng từ sinh khối nấm men
- Sinh khối nấm men được loại bỏ thành phần các hợp chất đắng từ dịch lên men bia.
- Xác định khối lượng nấm men thu hồi, phân tích độ ẩm (phương pháp sấy đến khối lượng không đổi ở 1050C) và protein tổng (phương pháp Kjeldahl ).
3. Ảnh hưởng của nồng độ NaOH trong quá trình thu nhận β-glucan tổng số
Mục đích: xác định nồng độ NaOH thích hợp để thu được β-glucan tổng số ít nhiễm tạp chất nhất.
Phương pháp:
Dùng NaOH với các nồng độ khác nhau để chiết tách β-glucan. Xác định hàm lượng đường hexose trong sản phẩm thu được bằng phương pháp đo OD ở bước sóng 490 nm. Xác định nồng độ NaOH thích hợp để chiết tách β-glucan ít bị nhiễm tạp chất.
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 1 nhân tố:
Nồng độ NaOH: 2%, 2,5%, 3% và 3,5% (w/v).
Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Chỉ tiêu đánh giá: độ tinh sạch của β-glucan, chọn nồng độ NaOH thích hợp cho quá trinh chiết tách β-glucan.
Tiến hành thí nghiệm:
Xử lý phần vỏ tế bào nấm men (Phạm Việt Cường, 2005):
Ủ phần cặn thu được sau khi ly tâm thu yeast extract với NaOH 3,3% (w/v) trong 18 giờ ở 75ºC.
Làm nguội đến 40ºC, bổ sung nước cất, lắc đều và ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút, thu phần cặn.
Bổ sung NaOH 3,3%, khuấy đều ở 75ºC trong 1 giờ. Để nguội đến 30ºC, bổ sung nước cất với tỉ lệ 1:1 (v/v), ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút, thu phần cặn (vỏ tế bào nấm men).
Chiết tách β-glucan:
Cân 30 gam vỏ tế bào nấm men cho vào bình thể tích 1 lít, thêm vào 900 mL NaOH ở các nồng độ 2%; 2,5%; 3% và 3,5%; khuấy đều ở 75ºC trong 2 giờ. Ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút, thu phần cặn.
Thêm 200 mL cồn tuyệt đối, khuấy đều và để trong 10 phút, ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút, thu phần cặn, lặp lại bước này 2 lần.
Thêm 200 mL dietylete, khuấy đều và để trong 10 phút, ly tâm ở 4000 vòng/phút trong 10 phút thu phần cặn và làm khô bằng không khí ở 45ºC.
Xác định nồng độ đường hexose trong sản phẩm bằng phương pháp Phenol-sulfuric acid (PSA) ở bước sóng 490 nm (Miller, 2010).
Dựa vào kết quả, xác định nồng độ NaOH thích hợp cho quá trình chiết tách β-glucan.
|
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |
