Microsoft Word Keng et al-Galley Proof docx

17/ Seow Eng Keng et al. 
 
Total phenolics content (TPC) 
TPC of coconut water was determined using Folin-Ciocalteu method as described by Tan et al. (2014). Coconut 
water (1 mL) was placed in a 100 mL volumetric flask followed by 70 mL of distilled water and 5 mL of Folin & 
Ciocalteu's phenol reagent (10 times dilution). Mixture was incubated for 5 min at room temperature before 
adding 15 mL of 7.5% (w/v) sodium carbonate and topped up to 100 mL with distilled water. Mixture was 
incubated for 2 h at room temperature. Measurement of absorbance was carried out in UV-1650 PC UV-Vis 
spectrophotometer at wavelength of 765 nm. TPC was expressed as gallic acid equivalents (GAE) using units of 
mg/L (mg GAE/L). 
Stock solution of gallic acid at 500 mg/L was prepared in deionised water. Working standard solutions 
of the mixture were prepared by dilution of stock solution to give final concentrations of 20, 40, 60, 80, and 100 
mg/L in deionised water. All the standard solutions were treated as those of coconut water prior to absorbance 
measurement at wavelength of 765 nm. 
Sugars content 
Glucose, fructose and sucrose contents in coconut water was determined using HPLC as described by Tan et al. 
(2014). Approximately 50 mL of coconut water was transferred into a 250 mL conical flask containing 2 g of 
Amberlite MB-150 ion exchange resins. The mixture was allowed to rest (with occasionally swirling) for 15 min 
to allow the ion exchange resins to bond with both the cations and anions present in the coconut water. After 15 
min, the mixture was filtered with muslin cloth and a portion of the filtrate (5 mL) was filtered through a pre-
activated (with 5 mL of methanol followed by 5 mL of deionised water) Sep Pak C
18
(Waters Corporation, 
Milford, USA). The filtrate was then diluted 25 times with deionised water and filtered through membrane filter 
0.45 µm (Whatman, 13 mm GD/X PTFE Filtration Media, Wycombe, UK) before being injected into the loop 
(volume: 20 µL) of the system. 
Stock solution of sugars (consists of fructose, glucose, and sucrose) at 1 mg/mL were prepare in 
deionised water. Standard solutions of the mixture were prepared by dilution of stock solution to give final 
concentrations of 0.2, 0.4, 0.6, and 0.8 mg/mL in deionised water. All the standard solutions underwent cleaning 
steps (Amberlite MB-150 ion exchange resins, Sep Pak C
18
, and membrane filter 0.45 µm) similar to those of 
coconut water prior to injection. Quantification of fructose, glucose and sucrose content in coconut water was 
performed using HPLC system equipped with a pump system (Waters Corporation, Waters 515 HPLC Pump, 
Milford, USA) and a refractive index detector (Waters Corporation, Waters 2414, Milford, USA). Separations of 
these sugars were carried out using Waters Sugar-Pak 1 column 300 mm × 6.5 mm, (Waters Corporation, 
Milford, USA) at 90°C. The flow rate was 0.5 mL/min and mobile phase used was 0.0001 M Ca-EDTA. 

tải về 221.3 Kb.

Chia sẻ với bạn bè của bạn: