ChuyêN ĐỀ: Ứng dụng di ruyền họC
Sử dụng plasmid tái tổ hợp để sản xuất sinh khối
tải về 1.11 Mb. Chế độ xem pdf
|
| 3.3.2. Sử dụng plasmid tái tổ hợp để sản xuất sinh khối
Để sản xuất sinh khối, các vector biểu hiện mang các gen ngoại lai mong muốn có thể thực hiện sự phiên mã các bản sao tạo dòng và sự dịch mã các mARN của chúng trong tế bào vật chủ. Những vector như thế dược dùng để biểu hiện các gen của sinh vật nhân thực trong E.coli hoặc tăng hiệu suất các sản phẩm của gen ở sinh vật nhân sơ. Mặc dù E. coli không phải là một vật chủ lý tưởng để biểu hiện các gen của eukaryote do chúng không có khả năng sửa đổi hậu dịch mã cho các chuỗi polypeptide của các protein có cấu trúc phức tạp. Tuy nhiên, trong một số trường hợp người ta vẫn có thể sử dụng vi khuẩn E. coli cho những protein có cấu trúc đơn giản hơn. Đối với những protein có cấu trúc phức tạp, vật chủ thường được sử dụng là các sinh vật nhân chuẩn (ví dụ: nấm men Saccharomyces cerevisiae, nấm mốc Aspergillusniger…) do chúng có thể hậu dịch mã được. 30 - Sản xuất các protein dung hợp: Protein dung hợp được mã hóa bởi một gen lai do sự dung hợp in vitro hai đoạn gen khác nhau. Vì vậy, protein dung hợp sẽ mang trình tự axit amin của hai protein khác biệt. Protein dung hợp có những đặc điểm sau: +Thường được sản xuất với lượng lớn do sự khởi đầu phiên mã và dịch mã được điều khiển bởi các trình tự tiêu chuẩn của vật chủ. + Có khối lượng phân tử lớn hơn so với hầu hết các protein của vật chủ và vì thế dễ dàng nhận biết khi điện di bằng gel polyacrylamide. Từ đó, băng protein dung hợp có thể được cắt ra khỏi gel, đông khô (lyophilize) sau đó nghiền thành bột và dùng như một kháng nguyên. + Có thể được tiết ra môi trường nhờ biểu hiện của vật chủ nếu gen của sinh vật nhân thực được gắn với trình tự mã hóa cho peptide tín hiệu (signal peptide), khi đó, peptide sẽ này tạo ra sự chuyển dịch qua màng. Tuy nhiên, hiện tượng này chỉ xảy ra ở một vài trường hợp. Hiện nay, dựa vào một số gen chỉ thị riêng biệt, người ra đã thiết kế hệ thống vector biểu hiện cùng với protein dung hợp tương ứng như họ pUR, pET system với các protein dung hợp tương ứng như LacZ,CDB, His.tag hay GTS. tải về 1.11 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|