Tiªu chuÈn b¶o vÖ thùc vËt 10 tcn 293 97

Tiªu chuÈn nµy quy ®Þnh ph­¬ng ph¸p x¸c ®Þnh d­ l­îng thuèc trõ nÊm bÖnh Benomyl trong l¹c, ®ç, ng«.

Theo Qui ®Þnh ban hµnh kÌm theo QuyÕt ®Þnh 150/NN-BVTV-Q§ ngµy 10/3/1995 cña Bé N«ng nghiÖp vµ CNTP nay lµ Bé N«ng nghiÖp vµ Ph¸t triÓn n«ng th«n.

2.1.1. Thuèc thö dïng trong c¸c phÐp ph©n tÝch ph¶i lµ lo¹i tinh khiÕt ph©n tÝch.

2.1.2. N­íc cÊt ph¶i lµ n­íc cÊt theo TCVN 2117-77.

2.1.3. TÊt c¶ c¸c phÐp x¸c ®Þnh ph¶i tiÕn hµnh song song víi Ýt nhÊt hai l­îng c©n mÉu thö.

2.1.4. D­ l­îng thuèc trõ nÊm bÖnh Benomyl lµ kÕt qu¶ d­ l­îng trung b×nh cña c¸c l­îng c©n mÉu thö.

2.2. X¸c ®Þnh d­ l­îng thuèc Benomyl:

2.2.1. Nguyªn t¾c:

D­ l­îng Benomyl ®­îc chiÕt ra khái mÉu b»ng dung m«i etyl axetat sau ®ã ®­îc thuû ph©n chuyÓn thµnh Carbendazim b»ng dung dÞch axit clohydric. Carbendazim ®­îc ph©n tÝch b»ng s¾c ký láng cao ¸p pha ®¶o. KÕt qu¶ ph©n tÝch ®­îc tÝnh dùa trªn sù so s¸nh tû sè sè ®o diÖn tÝch hoÆc chiÒu cao cña pÝc mÉu thö vµ pÝc mÉu chuÈn.

2.2.2. Dông cô, ho¸ chÊt vµ thiÕt bÞ:

• 
  B×nh cÇu dung tÝch 250ml;
  
• 
  B×nh ®Þnh møc dung tÝch 10ml, 5ml;
  
• 
  B×nh tam gi¸c dung tÝch 250ml;
  
• 
  Pipet 1ml;
  
• 
  Cèc dung tÝch 250ml;
  
• 
  PhÔu chiÕt dung tÝch 500ml;
  
• 
  Microxilanh 10 l;
  
• 
  ChÊt chuÈn Benomyl ®· biÕt tr­íc hµm l­îng;
  
• 
  Natrisunphat khan (Ho¹t ho¸ 500^oC trong 6-8 giê, ®Ó nguéi, cho vµo b×nh ®Ëy kÝn b¶o qu¶n trong b×nh hót Èm);
  
• 
  Dung dÞch axit clohydric 2N;
  
• 
  Dung dÞch hydroxit natri 1N,10N;
  
• 
  GiÊy läc;
  
• 
  Etyl axetat;
  
• 
  Clorofom;
  
• 
  Pha ®éng: hçn hîp metanol: n­íc: amoni¨c tû lÖ 60:40:0,6 theo thÓ tÝch;
  
• 
  Cèc nghiÒn dung tÝch 1 lÝt;
  
• 
  M¸y nghiÒn (kiÓu m¸y xay sinh tè);
  
• 
  M¸y l¾c;
  
• 
  HÖ thèng ch­ng cÊt quay ch©n kh«ng;
  
• 
  C©n ph©n tÝch (®é chÝnh x¸c 0,01mg);
  
• 
  Cét s¾c ký láng cao ¸p pha ®¶o 5 C 18 (4mm x 150mm);
  
• 
  M¸y s¾c ký láng cao ¸p víi detector tö ngo¹i;
  
• 
  M¸y ghi tÝch ph©n.
  

C©n chÝnh x¸c kho¶ng 10mg chÊt chuÈn Benomyl chÝnh x¸c tíi 0,01mg vµo b×nh ®Þnh møc 10ml. §Þnh møc tíi v¹ch b»ng n-hexane, ®­îc dung dÞch gèc.

B»ng ph­¬ng ph¸p pha lo·ng liªn tôc tõ dung dÞch cã nång ®é thu ®­îc ta ®­îc d·y dung dÞch chuÈn.

Dung dÞch Benomyl chuÈn ®­îc dÉn xuÊt ho¸ t­¬ng tù nh­ qu¸ tr×nh ¸p dông cho mÉu thö ë môc 2.2.4.2.

2.2.4. ChuÈn bÞ dung dÞch mÉu thö:

2.2.4.1. ChiÕt suÊt mÉu thö:

NghiÒn mÉu b»ng m¸y nghiÒn. C©n kho¶ng 20g mÉu l¹c (hoÆc ®ç hoÆc ng«) (m_m) chÝnh x¸c tíi 0,1g vµo b×nh tam gi¸c 250ml, thªm vµo ®ã 10g natri sunphat khan vµ 100ml etyl axetat, sau ®ã ®Ó yªn 5-10 phót. Thªm 2ml dung dÞch hydroxit natri 1N. L¾c b»ng m¸y l¾c 30 phót. Läc qua giÊy läc b¨ng xanh. Tr¸ng kü b»ng 75ml etyl axªtat.

2.2.4.2. DÉn xuÊt mÉu thö:

ChiÕt dÞch läc hai lÇn mçi lÇn víi 50ml axit clohydric 2N. Thu lÊy pha n­íc, chiÕt tiÕp víi 100ml clorofom. Lo¹i bá pha clorofom. Dïng dung dÞch hydroxit natri 10N ®iÒu chØnh pha n­íc ®Õn pH=10. Sau ®ã chiÕt hai lÇn mçi lÇn100ml clorofom. ChuyÓn líp clorofom vµo b×nh cÇu 250ml råi c« c¹n b»ng m¸y ch­ng cÊt quay ch©n kh«ng ë 40 ^oC. Thªm vµo ®ã chÝnh x¸c 5ml pha ®éng (V₁).

2.2.5. §iÒu kiÖn ph©n tÝch:

Pha ®éng: metanol: n­íc: amoni¨c tû lÖ 60:40:0,6 theo thÓ tÝch.

Tèc ®é dßng: 1-ml/phót.

L­îng mÉu b¬m: 20 l.

2.2.6. TiÕn hµnh ph©n tÝch trªn m¸y:

B¬m dung dÞch chuÈn (V_C) vµ dung dÞch mÉu (V_m), lÆp l¹i 3 lÇn.

2.2.7. TÝnh to¸n kÕt qu¶:

D­ l­îng thuèc trõ nÊm bÖnh Benomyl cã trong mÉu ®­îc tÝnh theo c«ng thøc:

T
rong ®ã:

A_m: Sè ®o trung b×nh diÖn tÝch hoÆc chiÒu cao cña pÝc mÉu thö.

A_C: Sè ®o trung b×nh diÖn tÝch hoÆc chiÒu cao cña pÝc mÉu chuÈn.

V_C: ThÓ tÝch dung dÞch mÉu chuÈn b¬m vµo m¸y, l.

V_m: ThÓ tÝch dung dÞch mÉu thö b¬m vµo m¸y, l.

C_C: Nång ®é dung dÞch chuÈn b¬m vµo m¸y, g/ml.

m_m: Khèi l­îng mÉu thö, g.

V₁: ThÓ tÝch cuèi cña dung dÞch mÉu thö, ml.

P: §é tinh khiÕt cña chÊt chuÈn, %.

R: HiÖu suÊt thu håi cña ph­¬ng ph¸p, %.

2.2.8. HiÖu suÊt thu håi vµ giíi h¹n ph¸t hiÖn cña ph­¬ng ph¸p:

- HiÖu suÊt thu håi cña ph­¬ng ph¸p: 70-110%.

- Giíi h¹n ph¸t hiÖn cña ph­¬ng ph¸p: 0,002mg/kg.

QuyÕt ®Þnh ban hµnh sè 14 ngµy 6 th¸ng 1 n¨m 1997 cña Bé N«ng nghiÖp & PTNT. 501