3.10. nghiªn cøu qui tr×nh s¶n xuÊt
Trøng thu ho¹ch tõ gµ miÔn dÞch ®îc chóng t«i chÕ thö s¶n phÈm theo 5 quy tr×nh s¶n xuÊt kh¸c nhau, chän ®îc QTSX4 lµ tèi u, ®¹t yªu cÇu vÒ c¸c tiªu chuÈn: vËt lý, v« trïng, HGKT x¸c ®Þnh b»ng ph¶n øng ngng kÕt ®¹t tõ 1/80-1/100, HGKT x¸c ®Þnh b»ng ph¶n øng ADP ®¹t tõ 1/8 - 1/16.
Quy tr×nh s¶n xuÊt kÌm theo phô lôc (phô lôc 02)
3.11. Nghiªn cøu qui tr×nh kiÓm nghiÖm vµ b¶o qu¶n chÕ phÈm
3.11.1. Kh¶o s¸t chØ tiªu c¶m quan cña s¶n phÈm
Theo dâi c¸c chØ tiªu c¶m quan 03 l« s¶n phÈm; mçi l« 20 mÉu trong vßng 06 th¸ng, chóng t«i thÊy cã sù kh¸c biÖt râ rÖt gi÷a c¸c mÉu s¶n phÈm ë ®iÒu kiÖn b¶o qu¶n kh¸c nhau. ë ®iÒu kiÖn nhiÖt ®é phßng kho¶ng 25oC, tÊt c¶ c¸c mÉu s¶n phÈm sau 01th¸ng ®· chuyÓn mµu tõ vµng sang tr¾ng ngµ, cã hiÖn tîng ph©n líp, sau 02 th¸ng cã l¾ng cÆn. ë nhiÖt ®é b¶o qu¶n 2-8oC trong 06 th¸ng tÊt c¶ c¸c mÉu s¶n phÈm ®Òu ®¹t yªu cÇu c¶m quan, kh«ng thay ®æi vÒ mµu s¾c s¶n phÈm, ®é ®ång nhÊt, kh«ng v¸ng, kh«ng cÆn. VËy, s¶n phÈm b¶o qu¶n ë 2-8oC lµ ®¹t yªu cÇu.
3.11.2. Kh¶o s¸t ®é v« trïng cña s¶n phÈm
Dïng 3 l« s¶n phÈm, mçi l« 20 mÉu ®Ó kiÓm tra v« trïng theo tiªu chuÈn ViÖt Nam (TCN) (Dîc ®iÓn ViÖt Nam II, TËp 3, NXB Y häc, trang 498)
S¶n phÈm ®îc kiÓm tra trªn c¸c m«i trêng sau: NA (nutrient agar), NB (nutrient broth), BA (blood agar), SA (sabouraud agar), Thioglycolat
C¸c m«i trêng kiÓm tra s¶n phÈm ®îc ®Ó trong tñ Êm 370C, theo dâi Ýt nhÊt 4 ngµy, riªng th¹ch nÊm SA ®Ó ë nhiÖt ®é phßng víi thêi gian theo dâi Ýt nhÊt 7 ngµy.
S¶n phÈm ®îc b¶o qu¶n ë 2-80C vµ cø sau 1 th¸ng th× kiÓm tra v« trïng 01 lÇn, kh¶o s¸t trong 06 th¸ng. KÕt qu¶ tr×nh bµy trong b¶ng 27.
3.11.3. Kh¶o s¸t hiÖu gi¸ kh¸ng thÓ trong s¶n phÈm
X¸c ®Þnh b»ng ph¶n øng ngng kÕt nhanh trªn phiÕn kÝnh vµ ph¶n øng ADP gi÷a s¶n phÈm ®îc b¶o qu¶n ë 2-80C víi kh¸ng nguyªn vµ ®éc tè E. coli t¹i c¸c thêi ®iÓm kh¸c nhau, kh¶o s¸t trong 6 th¸ng. KÕt qu¶ kh¶o s¸t ®é v« trïng vµ hiÖu gi¸ kh¸ng thÓ trªn b¶ng 27.
Tõ b¶ng 27 ta thÊy trong ®iÒu kiÖn b¶o qu¶n 2-80C, ®é v« trïng cña s¶n phÈm ®îc b¶o ®¶m trong 05 th¸ng. Sau 05 th¸ng cã 04 mÉu trong tæng sè 60 mÉu cña c¶ hai l« cã t¹p trïng nhng kh«ng ph¸t hiÖn cã nÊm trong s¶n phÈm. HiÖu gi¸ kh¸ng thÓ trong s¶n phÈm kh«ng thay ®æi trong suèt thêi gian b¶o qu¶n.
B¶ng 27: KÕt qu¶ kh¶o s¸t chØ tiªu v« trïng vµ hgkt trong thêi gian b¶o qu¶n
|
L« SX
|
Thêi gian theo dâi
|
HGKT
|
KÕt qu¶ kiÓm tra v« trïng
|
Ngng kÕt
|
ADP
|
NA
|
NB
|
BA
|
SA
|
Thio
|
-
|
+
|
-
|
+
|
-
|
+
|
-
|
+
|
-
|
+
|
L«
02/09/08
(n = 20)
|
T0
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T1
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T2
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T3
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T4
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T5
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T6
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
18
|
2
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
L«
15/11/08 (n = 20)
|
T0
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T1
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T2
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T3
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T4
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T5
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T6
|
1/80
|
1/8
|
20
|
0
|
19
|
1
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
L«
28/01/09 (n = 20)
|
T0
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T1
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T2
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T3
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T4
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T5
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
T6
|
1/100
|
1/16
|
20
|
0
|
19
|
1
|
20
|
0
|
20
|
0
|
20
|
0
|
3.11.4. Kh¶o s¸t ®é an toµn cña s¶n phÈm
B¶ng 28: §é an toµn cña s¶n phÈm trªn chuét b¹ch vµ thá
§éng vËt thÝ nghiÖm
|
§êng tiªm
|
Ngµy 1
|
Ngµy 2
|
Ngµy 3
|
Ngµy 4
|
Ngµy 5
|
Ngµy 6
|
Ngµy 7
|
KÕt qu¶
|
Chuét b¹ch
|
5 con
|
Tiªm díi da
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% chuét sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
5 con
|
Tiªm phóc xoang
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
LiÒu
0,4 ml/con
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% chuét sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
Thá
|
3 con
|
Tiªm díi da
|
LiÒu
3 ml/con
|
LiÒu
3 ml/con
|
LiÒu
3 ml/con
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% thá sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
3 con
|
Tiªm phóc xoang
|
LiÒu
5 ml/con
|
LiÒu
5 ml/con
|
LiÒu
5 ml/con
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% thá sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
B¶ng 29: §é an toµn cña s¶n phÈm trªn lîn
§éng vËt thÝ nghiÖm
|
§êng tiªm
|
Ngµy 1
|
Ngµy 2
|
Ngµy 3
|
Ngµy 4
|
Ngµy 5
|
Ngµy 6
|
Ngµy 7
|
KÕt qu¶
|
Lîn
<5 kg
( 20- 30 ngµy tuæi)
|
10
con
|
Tiªm b¾p thÞt
|
LiÒu
2 ml/kgTT
|
LiÒu
2 ml/kgTT
|
LiÒu
2 ml/kgTT
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% lîn sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
10 con
|
Tiªm phóc xoang
|
LiÒu
4 ml/kgTT
|
LiÒu
4 ml/kgTT
|
LiÒu
4 ml/kgTT
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% lîn sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
Lîn
>5 kg
(>30 ngµy tuæi)
|
10 con
|
Tiªm b¾p thÞt
|
LiÒu 1,5ml/kgTT
|
LiÒu 1,5ml/kgTT
|
LiÒu 1,5ml/kgTT
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% lîn sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
|
10 con
|
Tiªm phóc xoang
|
LiÒu
3 ml/kgTT
|
LiÒu
3 ml/kgTT
|
LiÒu
3 ml/kgTT
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
B×nh thêng
|
100% lîn sèng khoÎ m¹nh b×nh thêng
| -
KÕt qu¶ kiÓm tra chØ tiªu hiÖu lùc cña s¶n phÈm
+ Ph¬ng ph¸p ®¸nh gi¸ b»ng ph¶n øng ngng kÕt trùc tiÕp gi÷a s¶n phÈm víi kh¸ng nguyªn E. coli vµ b»ng ph¶n øng ADP gi÷a s¶n phÈm vµ ®éc tè E. coli.
Pha lo·ng kh¸ng thÓ trong s¶n phÈm b»ng níc muèi sinh lý theo ®é pha lo·ng kh¸c nhau.
Víi ph¶n øng ngng kÕt nhanh, lÊy mét lîng kh¸ng thÓ ®· pha ë mçi hiÖu gi¸ vµ mét lîng kh¸ng nguyªn E. coli b»ng nhau, trén ®Òu, ®Ó ë nhiÖt ®é kho¶ng 250C. §äc kÕt qu¶ sau 3 - 5 phót b»ng m¾t thêng.
Víi ph¶n øng ADP còng lÊy mét lîng kh¸ng thÓ ®· pha ë mçi hiÖu gi¸ vµ mét lîng ®éc tè E. coli nhá vµo c¸c giÕng, trong ®ã ®éc tè E. coli nhá vµo giÕng trung t©m, kh¸ng thÓ nhá vµo c¸c giÕng xung quanh. KÕt qu¶ ®äc sau 72 giê.
§èi chøng ©m lµm t¬ng tù bíc trªn nhng thay thÕ kh¸ng thÓ cña s¶n phÈm b»ng níc sinh lý.
§èi chøng d¬ng lµm t¬ng tù bíc trªn nhng thay thÕ kh¸ng thÓ
cña s¶n phÈm b»ng kh¸ng thÓ E. coli ®· biÕt.
KÕt qu¶: chÕ phÈm kh¸ng thÓ ®¹t hiÖu gi¸ ngng kÕt ë ®é pha lo·ng ≥1/50, hiÖu gi¸ ADP ë ®é pha lo·ng 1/4.
+ KÕt qu¶ kiÓm tra chØ tiªu hiÖu lùc cña s¶n phÈm trªn chuét:
Dïng 20 con chuét b¹ch träng lîng trung b×nh mçi con 18 - 20g, khoÎ m¹nh, chia lµm 2 nhãm:
Nhãm 1: 10 con, mçi con tiªm 0,4 ml kh¸ng thÓ vµo phóc xoang. Sau 24 giê tiªm lÇn hai cïng liÒu.
Nhãm 2: 10 con kh«ng tiªm lµm ®èi chøng.
Sau 48 giê kÓ tõ khi tiªm kh¸ng thÓ lÇn hai, c«ng cêng ®éc cho c¶ hai nhãm chuét víi liÒu tiªm díi da mçi chuét 0,2 ml dÞch nu«i cÊy E. coli ®a gi¸ nu«i cÊy 24 giê (10 chñng E. coli gièng sau khi nu«i cÊy 24h, ®em trén ®Òu víi tû lÖ b»ng nhau). Theo dâi chuét trong 7 ngµy, ®¸nh gi¸ kÕt qu¶. TÝnh hiÖu sè cña sè lîng chuét sèng sãt cña nhãm 1 (nhãm ®îc tiªm miÔn dÞch b»ng kh¸ng thÓ lßng ®á trøng) vµ sè lîng chuét sèng sãt cña nhãm 2 (nhãm ®èi chøng). KÕt qu¶ ë b¶ng 30.
B¶ng 30: HiÖu lùc cña s¶n phÈm trªn chuét
Nhãm thÝ nghiÖm
|
Sè lîng chuét chÕt/sè chuét tiªm
|
Kh¶ n¨ng b¶o hé
(% sè chuét sèng)
|
Nhãm 1
|
0/10
|
100%
|
Nhãm 2
|
8/10
|
20%
|
Qua kÕt qu¶ trªn ta thÊy, s¶n phÈm cã kh¶ n¨ng b¶o hé tèt ®èi víi chuét thÝ nghiÖm (100%), trong khi nhãm ®èi chøng tû lÖ chuét sèng sãt sau khi c«ng cêng ®éc chØ ®¹t 20%.
KÕt luËn vµ kiÕn nghÞ
KÕt luËn
-
§· thu thËp ®îc 340 mÉu bÖnh phÈm lîn èm do tiªu ch¶y vµ sng phï ®Çu ë 5 tØnh ®¹i diÖn cho 3 miÒn B¾c - Trung - Nam. Tõ 340 mÉu bÖnh phÈm nµy ®· sµng läc vµ tuyÓn chän ®îc 10 chñng E. coli ®iÓn h×nh cã ®éc lùc m¹nh, tÝnh kh¸ng nguyªn tèt ®Ó lµm gièng.
-
§· x¸c ®Þnh ®îc ®éng th¸i sinh trëng cña 10 chñng E. coli ph©n lËp ®îc. C¸c chñng E. coli nµy t¨ng trëng cùc ®¹i sau 24 giê nu«i cÊy sau ®ã gi¶m dÇn, trong khi pH cña m«i trêng nu«i cÊy gi¶m cùc tiÓu sau 24 giê nu«i cÊy sau ®ã t¨ng dÇn.
-
ViÖc lµm bÊt ho¹t vµ gi¶i ®éc kh¸ng nguyªn b»ng formol 30/00 ë 37oC trong 24h cho hiÖu qu¶ tèt. Sau khi bÞ bÊt ho¹t vµ gi¶i ®éc, ®éc lùc bÞgi¶m ®i nhng vÉn gi÷ ®îc tÝnh kh¸ng nguyªn.
-
Alum 20/00 lµ chÊt bæ trî kh¸ng nguyªn an toµn vµ lµm t¨ng miÔn dÞch.
-
§· nghiªn cøu ®îc qui tr×nh miÔn dÞch tèi u cho gµ ®Ó thu ®îc hµm lîng kh¸ng thÓ cao nhÊt trong lßng ®á trøng. Hµm lîng kh¸ng thÓ trong lßng ®á trøng kh¸ng víi kh¸ng nguyªn th©n E. coli lu«n æn ®Þnh ë 1/118,2 ®Õn 1/243,2 vµ hµm lîng kh¸ng thÓ kh¸ng víi ®éc tè E. coli dao ®éng tõ 1/8 ®Õn 1/16.
-
5>
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |