tiªu chuÈn ngò cèc vµ ®Ëu ®ç
|
10 TCN 422-2000
|
Tiªu chuÈn ngµnh | 10 tcn 422-2000 |
n«ng s¶n thùc phÈm
x¸c ®Þnh hµm lîng lizin trong c¸c lo¹i h¹t
ph¬ng ph¸p quang phæ
Agricultural Food Products - Determination of lysine content in grains.
Spectrophotometric method |
Tiªu chuÈn nµy ¸p dông cho c¸c lo¹i h¹t ngò cèc (g¹o, mú, ng«...), h¹t ®Ëu ®ç (®Ëu t¬ng, ®Ëu xanh...) vµ quy ®Þnh phÐp thö x¸c ®Þnh hµm lîng lizin b»ng ph¬ng ph¸p quang phæ.
1. LÊy mÉu thö
TiÕn hµnh lÊy mÉu theo TCVN 5451-91 (ISO 950-1979)
2. Nguyªn t¾c
Dùa trªn ph¶n øng t¹o phøc mµu cña c¸c nhãm -NH2 tù do cña lizin trong ph©n tö protein víi thuèc thö ninhydrin vµ ®o ®é hÊp thô quang häc cña phøc mµu t¹o thµnh ë bíc sãng 540nm. Dung dÞch tiªu chuÈn ®îc sö dông lµ dung dÞch l¬xin v× ph©n tö l¬xin t¬ng ®¬ng víi lizin vµ chØ chøa 1 nhãm -NH2.
3. Thuèc thö
TÊt c¶ thuèc thö ph¶i cã chÊt lîng tinh khiÕt ph©n tÝch. Níc sö dông lµ níc cÊt hoÆc lµ níc cã ®é tinh khiÕt t¬ng ®¬ng.
3.1. Dung dÞch ®Öm
Hoµ tan 30g natri formiat trong 60ml níc cÊt, thªm 10ml dung dÞch axit formic 86-88% vµ thªm tiÕp níc cÊt cho ®ñ 100ml.
3.2. Thuèc thö ninhydrin
Cho 1g ninhydrin tinh khiÕt vµ 1g CdCl2.2,5H2O vµo b×nh tèi cã nót mµi. Thªm 25ml dung dÞch ®Öm (3.1) vµ 75ml etylen glycol, l¾c ®Òu ®Õn tan hoµn toµn. Thuèc thö ®îc æn ®Þnh trong 1 th¸ng ë nhiÖt ®é 40C , trong bãng tèi.
3.3. Dung dÞch rîu etylic 20% vµ 95%.
3.4. Dung dÞch natri cacbonat 2% vµ 4%
3.5. Dung dÞch l¬xin chuÈn
C©n 100mg l¬xin tinh khiÕt víi ®é chÝnh x¸c 0,1mg cho vµo b×nh ®Þnh møc 100ml, hoµ tan hoµn toµn b»ng dung dÞch rîu etylic 20% vµ ®a thÓ tÝch ®Õn v¹ch ®Þnh møc b»ng dung dÞch nµy. 1ml dung dÞch l¬xin chuÈn chøa 1mg l¬xin.
4. Dông cô
C©n ph©n tÝch cã ®é chÝnh x¸c 0,0001g
M¸y nghiÒn mÉu
R©y cã lç sµng 250m
Quang phæ kÕ cã bíc sãng 540nm.
Nåi c¸ch thuû cã ®iÒu chØnh nhiÖt ®é tù ®éng
èng nghiÖm cì 18x150mm
B×nh ®Þnh møc dung tÝch 100, 500ml.
Pipet chia ®é dung tÝch 1, 2, 10, 20ml
Gi¸ èng nghiÖm b»ng nh«m
PhÔu läc cã ®êng kÝnh 4,0 - 4,5cm
GiÊy läc ®Þnh lîng.
5. TiÕn hµnh thö
5.1. X©y dùng ®å thÞ chuÈn
Cho vµo c¸c b×nh ®Þnh møc dung tÝch 100ml lÇn lît 0, 10, 20, 30 vµ 40ml dung dÞch chuÈn gèc l¬xin (môc 3.5). Dïng dung dÞch rîu etylic 20% ®a thÓ tÝch ®Õn v¹ch møc vµ l¾c ®Òu. Nång ®é l¬xin trong c¸c dung dÞch chuÈn t¬ng øng sÏ lµ 0, 100, 200, 300 vµ 400g/ml. Dïng pipet hót chÝnh x¸c 0,5ml mçi dung dÞch chuÈn nµy cho lÇn lît vµo c¸c èng nghiÖm. Thªm tiÕp vµo mçi èng nghiÖm 0,5ml dung dÞch Na2CO3 4% vµ 2ml thuèc thö ninhydrin. L¾c ®Òu mÉu vµ ®un trªn nåi c¸ch thuû 30 phót. Sau ®ã lµm l¹nh b»ng c¸ch nhóng c¶ gi¸ èng nghiÖm vµo níc. Thªm tiÕp vµo mçi èng nghiÖm 5ml dung dÞch rîu etylic 95% l¾c kü vµ ®o ®é hÊp thô quang häc trªn quang phæ kÕ ë bíc sãng 540nm.
X©y dùng ®å thÞ chuÈn víi trôc tung lµ c¸c gi¸ trÞ ®é hÊp thô quang häc ®o ®îc, trôc hoµnh lµ nång ®é cña c¸c dung dÞch l¬xin chuÈn tõ 0 ®Õn 400g/1ml.
5.2. ChuÈn bÞ mÉu thö
Tõ mÉu trung b×nh nghiÒn kho¶ng 10g mÉu ®Õn kÝch thíc lät hoµn toµn qua lç sµng 250m.
5.3. TiÕn hµnh
Cho vµo èng nghiÖm 200-250mg bét thuû tinh s¹ch, c©n chÝnh x¸c 30mg mÉu thö ®· ®îc chuÈn bÞ theo (5.1) cho vµo mçi èng nghiÖm. Mçi mÉu tiÕn hµnh 2 lÇn song song. Thªm vµo èng nghiÖm 1ml dung dÞch Na2CO3 2%. Trén ®Òu mÉu víi bét thuû tinh, ®Æt vµo gi¸ èng nghiÖm vµ ®Æt vµo bÕp c¸ch thuû ®· ®¹t nhiÖt ®é 800C, gi÷ trong10 phót. Dïng ®òa thuû tinh khuÊy ®Òu dung dÞch thµnh thÓ ®ång nhÊt. Cho vµo mçi èng nghiÖm 2 ml ninhydrin. KhuÊy ®Òu mÉu vµ ®un trªn nåi c¸ch thuû 30 phót. Sau ®ã lµm l¹nh b»ng c¸ch nhóng c¶ gi¸ èng nghiÖm vµo níc. Sau khi nguéi, cho vµo mçi èng nghiÖm 5ml dung dÞch rîu etylic 95%, l¾c kü vµ läc qua giÊy läc trªn phÔu thuû tinh ®êng kÝnh 4,0 - 4,5 cm. §o ®é hÊp thô quang häc cña c¸c dÞch läc trªn quang phæ kÕ ë bíc sãng 540 nm, ®óng theo tr×nh tù thùc hiÖn khi lªn mµu.
NÕu gÆp mÉu cho mµu xanh lam th× cã thÓ pha lo·ng b»ng dung dÞch rîu etylic 95% vµ khi tÝnh to¸n ph¶i tÝnh ®Õn hÖ sè pha lo·ng.
Hµm luîng lizin cña c¸c mÉu thö ®îc tÝnh theo ®å thÞ chuÈn (môc 5.1) øng víi c¸c dung dÞch l¬xin cã nång ®é tõ 0 ®Õn 400g/1ml
6. TÝnh to¸n kÕt qu¶
6.1. Hµm lîng lizin (X1, %) trong mÉu thö ®îc tÝnh theo c«ng thøc:
Trong ®ã:
C: Nång ®é l¬xin trong mÉu thö t×m thÊy trªn ®å thÞ chuÈn, g/ml.
m: Khèi lîng mÉu thö, mg
1000: HÖ sè chuyÓn ®æi tõ g sang mg
: HÖ sè chuyÓn ®æi tõ l¬xin sang lizin
KÕt qu¶ phÐp thö lµ trÞ sè trung b×nh sè häc cña hai lÇn ph©n tÝch song song.
6.2. Hµm lîng lizin trong mÉu thö tÝnh theo chÊt kh« (X2, %) x¸c ®Þnh theo c«ng thøc sau:
Trong ®ã:
X1: Hµm lîng lizin trong mÉu thö ë d¹ng kh« kh«ng khÝ, %
W: §é Èm cña mÉu thö, %
* Chó ý:
Trong nghiªn cøu, hµm lîng lizin trong mÉu thö thêng tÝnh b»ng tû lÖ phÇn tr¨m so víi protein (X3, %), theo c«ng thøc sau:
Trong ®ã:
X2: Hµm lîng lizin trong mÉu thö tÝnh theo chÊt kh«, %
P: Hµm lîng protein trong mÉu thö tÝnh theo chÊt kh«, %
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |