TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 7700-1 : 2007 iso 11290-1 : 1996 with amendment 1: 2004
B.1. Môi trường tăng sinh chọn lọc ban đầu: Canh thang nửa Fraser
tải về 0.57 Mb.
|
B.1. Môi trường tăng sinh chọn lọc ban đầu: Canh thang nửa Fraser B.1.1. Môi trường cơ bản B.1.1.1. Thành phần
B.1.1.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần cơ bản hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,2 ± 0,24) ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường vào các bình cầu (6.7) có dung tích thích hợp để thu được các lượng cần thiết cho phép thử (xem 9.1). Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 °C. CHÚ THÍCH 11: Có thể bổ sung dung dịch liti clorua (B.1.2) hoặc dung dịch axit nalidixic (B.1.3) vào môi trường cơ bản (B.1.1) trước khi hấp áp lực. B.1.2. Dung dịch liti clorua B.1.2.1. Thành phần
B.1.2.2. Chuẩn bị Cho liti clorua vào nước. Khử trùng bằng cách lọc.
B.1.3.2. Chuẩn bị Hòa tan muối natri của axit nalidixic trong natri hydroxit. Lọc để khử trùng.
B.1.4.2. Chuẩn bị Hòa tan acriflavin hydroclorua trong nước. Lọc để khử trùng.
B.1.5.2. Chuẩn bị Hòa tan sắt (III) amoni xitrat trong nước. Lọc để khử trùng.
B.1.6.2. Chuẩn bị Trước khi sử dụng, cho bốn dung dịch (B.1.2 đến B.1.5) vào từng phần 100 ml môi trường cơ bản (B.1.1). B.2. Môi trường tăng sinh chọn lọc thứ cấp: Canh thang Fraser B.2.1. Môi trường cơ bản B.2.1.1 Thành phần
B.2.1.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,2 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Chuyển môi trường vào ống nghiệm có dung tích thích hợp để thu được lượng cần thiết cho phép thử. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121 °C.
Xem B.1.4. B.2.3. Dung dịch sắt (III) amoni xitrat Xem B.1.5. B.2.4. Môi trường hoàn chỉnh Trước khi sử dụng, cho các phần 0,1 ml của các dung dịch B.2.2 và B.2.3 vào mỗi ống nghiệm đựng (các lượng 10 ml) môi trường cơ bản (B.2.1). Trộn nhẹ. B.3. Thạch Listeria theo Ottaviani và Agosti (ALOA5)) B.3.1. Môi trường cơ bản B.3.1.1. Thành phần
B.3.1.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần khô hoặc môi trường cơ bản hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun sôi. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121 °C. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,2 ± 0,2, nếu cần. B.3.2. Dung dịch muối natri của axit nalidixic
Hòa tan muối natri của axit nalidixic trong 5 ml natri hydroxit và lọc để khử trùng. B.3.3. Dung dịch xeftazidim
Hòa tan xeflazidim trong 5 ml nước và lọc qua màng 0,45 m để khử trùng. B.3.4. Dung dịch polymyxin B
Hòa tan polymyxin B trong 5 ml nước và lọc qua màng 0,45 m để khử trùng. B.3.5. Kháng sinh bổ sung B.3.5.1. Dung dịch xycloheximit
Hòa tan xycloheximit trong 2,5 ml etanol và sau đó thêm 2,5 ml nước. Lọc qua màng 0,45 m để khử trùng. B.3.5.2. Dung dịch amphoterixin B (làm dung dịch thay thế cho xycloheximit)
Hòa tan amphoterixin trong dung dịch HCI/DMF. Lọc qua màng 0,45 m để khử trùng. CẢNH BÁO - Dung dịch HCI/DMF rất độc, cần thận trọng khi sử dụng. B.3.6. Dung dịch bổ sung Hòa tan 2 g L--phosphatidylinositol (Sigma P 6636 ®6)) trong 50 ml nước lạnh. Khuấy khoảng 30 phút cho đến khi thu được dung dịch đồng nhất. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121 °C và làm nguội đến 48 °C đến 50 °C. B.3.7. Môi trường hoàn chỉnh B.3.7.1. Thành phần
B.3.7.2. Chuẩn bị Cho các dung dịch trên vào môi trường cơ bản tan chảy ở khoảng 50 °C, trộn kỹ sau môi lần thêm. pH của môi trường hoàn chỉnh phải là 7,2 ± 0,2 ở 25 °C. Môi trường hoàn chỉnh phải mờ đục đồng đều. B.3.7.3. Chuẩn bị các đĩa thạch Cho vào mỗi đĩa Petri từ 15 ml đến 20 ml môi trường hoàn chỉnh vừa mới chuẩn bị, rồi để cho đông đặc. B.3.8. Kiểm tra tính năng về đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy Đối với việc xác định tính chọn lọc và hiệu quả, xem ISO/TS 11133-2. Bảng B.1 đưa ra các chi tiết về kiểm tra tính năng đối với thạch Listeria theo Ottaviani và Agosti. Bảng B.1 - Kiểm tra tính năng của Thạch theo Ottaviani và Agosti
B.4. Huyền phù huyết cầu cừu Giữ tế bào huyết cừu ở 3 °C ± 2 °C trước khi sử dụng. Trước khi sử dụng phải kiểm tra dấu hiệu phân giải huyết (bị đỏ) trong lớp huyết thanh phía trên. Nếu không phân giải huyết, thì lấy 2 ml lớp tế bào đỏ phía dưới cho vào 98 ml dung dịch đệm PBS (B.12). Nếu thấy xuất hiện phân giải huyết, thì hòa khoảng 4 ml lớp tế bào đỏ trong 10 ml dung dịch đệm PBS và trộn nhẹ, rồi ly tâm. Nếu thấy có lớp nổi phía trên màu đỏ chứng tỏ có sự phân giải huyết, thì không sử dụng nữa và loại bỏ huyền phù gốc này. Mặt khác, gạn lớp nổi phía trên và cho 2 ml huyền phù tế bào này vào 98 ml dung dịch đệm PBS. Bảo quản huyền phù này đến 5 ngày ở 3 °C ± 2 °C. Nếu thấy xuất hiện phản giải huyết thì loại bỏ. B.5. Môi trường nuôi cấy đặc: Thạch từ dịch chiết nấm men trypton đậu tương (TSYEA) B.5.1. Thành phần
B.5.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun sôi. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,3 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường này vào các ống nghiệm có dung tích thích hợp để có được các lượng cần thiết cho phép thử. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 °C. Để yên trong tư thế nghiêng. Để chuẩn bị các đĩa thạch, phân phối vào các đĩa Petri vô trùng với các lượng môi trường thích hợp cho phép thử. Để yên cho đông đặc.
B.6.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước bằng cách đun sôi, nếu cần. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,3 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường này vào các ống nghiệm hoặc bình có dung tích thích hợp để có được các lượng cần thiết cho phép thử. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 °C.
B.7.1.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun sôi. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,2 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường này vào các bình có dung tích thích hợp để có được các lượng cần thiết cho phép thử. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực (6.1) ở nhiệt độ 121 °C.
B.7.3.2. Chuẩn bị Cho huyết cừu vào môi trường cơ bản đã làm nguội đến 47 °C. Trộn đều. Phân phối môi trường này vào các đĩa Petri vô trùng với các lượng thích hợp cho phép thử. Để yên cho đông đặc.
B.8.1.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun nóng, nếu cần. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 6,8 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường này vào các ống nghiệm có dung tích thích hợp để có được các lượng cần thiết cho phép thử. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121 °C.
B.8.2.2. Chuẩn bị Hòa tan riêng rẽ từng hydrat cacbon vào 100 ml nước. Lọc để khử trùng.
Thêm x ml dung dịch B.8.2 vào 9x ml môi trường cơ bản (B.8.1) đối với từng loại hydrat cacbon. B.9. Môi trường thạch di động B.9.1. Thành phần
B.9.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun sôi. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,3 ± 0,2 ở 25 °C, nếu cần. Phân phối môi trường này với các lượng 5 ml vào các ống nghiệm. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121 °C.
Đối với phép thử này có thể sử dụng các đĩa thạch huyết cừu (B.7), nhưng tốt nhất là sử dụng các đĩa thạch hai lớp có lớp môi trường huyết cừu rất mỏng (xem B.10.3). B.10.1. Môi trường cơ bản Xem B.7.1. B.10.2. Môi trường huyết cừu Xem B.7.3.1. B.10.3. Môi trường hoàn chỉnh Phân phối môi trường cơ bản (B.10.1) vào các đĩa Petri vô trùng, với các lượng khoảng 10 ml cho mỗi đĩa và để yên cho đông đặc. Rót đều một lớp rất mỏng môi trường huyết cừu (B.10.2) với các lượng không lớn hơn 3 ml trên một đĩa. Để yên cho đông đặc. Nếu cho môi trường huyết cừu vào các đĩa môi trường cơ bản đã chuẩn bị trước, thì có thể phải làm ấm các đĩa này 20 phút bằng cách đặt chúng vào tủ ấm để ở 37 °C trước khi rót lớp môi trường huyết cừu.
Chủng phân giải huyết của S.aureus (ví dụ: NCTC 1803 hoặc ATCC 25923) và chủng R.equi (ví dụ: NCTC 1621 hoặc ATCC 6939) cần phải qua phép thử CAMP. Không phải tất cả các chủng S.aureus đều thích hợp đối với phép thử CAMP. Bảo quản các chất cấy gốc của S. aureus, R. equi, L. monocytogenes, L. innocua và L. ivanivii bằng cách nuôi cấy lên môi trường TSYEA (B.5.2), nuôi ấm ở 35 oC hoặc 37 °C từ 24 giờ đến 28 giờ, hoặc cho đến khi thấy mọc và bảo quản trong tủ lạnh 3 °C ± 2 °C. Cấy truyền ít nhất một lần trong một tháng.
Sử dung dung dịch 3 % (tính theo khối lượng). B.12. Dung dịch muối đệm phosphat (PBS) B.12.1. Thành phần
B.12.2. Chuẩn bị Hòa tan các thành phần trong nước. Chỉnh pH, sao cho sau khi khử trùng là 7,2 ± 0,2 ở 25°C, nếu cần. Khử trùng 15 phút trong nồi hấp áp lực ở nhiệt độ 121°C. PHỤ LỤC C (tham khảo) PHÉP THỬ RỌI HENRY Kiểm tra các đĩa, sử dụng nguồn ánh sáng trắng, đủ sáng để rọi tốt các đĩa, rọi vào đáy đĩa một gốc 45° (xem hình C.1). Khi được kiểm tra dưới ánh sáng truyền trệch góc này (rọi Henry) trực tiếp trên đĩa, thì các khuẩn lạc Listeria spp cho thấy có màu xanh nhạt và bề mặt nổi hạt. 
Hình C.1 - Kiểm tra các đĩa về khuẩn lạc nghi ngờ PHỤ LỤC D (tham khảo) KẾT QUẢ THỬ LIÊN PHÒNG THỬ NGHIỆM Một phép thử cộng tác quốc tế do Phòng thử nghiệm Khoa học Trung tâm của Bộ Nông nghiệp, Thủy sản và Thực phẩm Anh tổ chức năm 1998, trong phạm vi dự án Châu Âu SNT CT 962098 (xem [3), [4]). Trong phép thử này gồm có 19 phòng thử nghiệm của 14 nước Châu Âu và tiến hành thử trên phomat tươi, thịt xay, bột trứng và mẫu chuẩn. Các mẫu thực phẩm, mỗi loại được kiểm tra ở hai mức nhiễm bẩn khác nhau và mẫu kiểm chứng âm tính. Các mẫu này đều bị nhiễm cả L. monocytogenes và L. innocua (Xem bảng D.1), nghĩa là có độ nhạy thấp. Do thiếu các nguồn cần thiết của các phòng thử nghiệm để tham gia vào phép thử này, mà đã không thể sử dụng cả hai môi trường phân lập Oxford và PALCAM cho tất cả các phòng thử nghiệm: 11 phòng đã sử dụng môi trường PALCAM và 9 phòng đã sử dụng môi trường Oxford. Bảng D.1 - Các mẫu nhiễm bẩn
Các giá trị về đặc trưng tính năng thu được từ phép thử cộng tác này cho thấy đối với từng loại mẫu trong các bảng từ D.2 đến bảng D.5. Các dữ liệu thu được với thạch Oxford và PALCAM đã được gộp lại. Dữ liệu thu được từ một số phòng thử nghiệm đã được loại ra khỏi tính toán, chỉ với các lý do kỹ thuật nhận biết rõ (lệch khỏi qui trình). Bảng D.2 - Kết quả phân tích dữ liệu thu được với các mẫu bột trứng khô
Bảng D.3 - Kết quả phân tích dữ liệu thu được với các mẫu thịt xay
Bảng D.4 - Kết quả phân tích dữ liệu thu được với các mẫu phomat tươi
Bảng D.5 - Kết quả phân tích dữ liệu thu được với các mẫu chuẩn
THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] OTTAVIANI, F., OTTAVIANI, M., AGOSTI, M. Differential agar medium for Listeria monocytogenes. Quimper Froid Symposium Proceedings, P6 ADRIA Quimper, 16-18 June, 1997 [2] LECLERCQ, A. Colonial atypical morphology and low recoveries of Listeria monocytogenes strains on Oxford, PACAM, Rapid’L. mono and ALOA solid media. J.Microbiol. Methods, 57, 2004, pp. 251-258 [3] Report of the trial “Detection of Listeria monocytogenes according to EN ISO 11290-1:1997”, available from CSL, Sand Hutton, YO4 1LZ, York, UK, 1999 [4] SCOTTER, S., LANGTON, S., LOMBARAD, B.. LAHELLEC, C., SCHULTEN, S., NAGELKERKE, N., IN'T VELD, P., ROLLIER, P. and BOHNERT, M. validiation of ISO method 11290 - Part 1: Detection of Listeria monocytogenes in foods. International Journal of Food Microbiology, 64, 2001, pp. 259-306 [5] OTTAVIANI, F., OTTAVIANI, M., AGOSTI, M. Esperienza su un agar selettivo e differenziale per L. mono. Industrie Alimentari, 1997 [6] ISO/TS 11133-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media. 1) ALOA là một ví dụ về môi trường thích hợp có bán sẵn. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và tổ chức ISO không ấn định phải sử dụng sản phẩm này. Có thể sử dụng các môi trường khác nếu chúng cho các kết quả tương đương. 2) Việc kiểm tra này là không cần thiết nếu người phân tích thường xuyên phân tích phát hiện L. monocytogenes. 3) Điều này có thể thấy rõ hơn bằng cách chuyển bất kỳ một khuẩn lạc mọc trên bề mặt đĩa thạch xung quanh dịch cấy đánh dấu. 4) Xem TCVN 6404 (ISO 7218). 5) ALOA là một ví dụ về môi trường thích hợp có bán sẵn. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và tổ chức ISO không ấn định phải sử dụng sản phẩm này. Có thể sử dụng các môi trường khác nếu chúng cho các kết quả tương đương. 6) P6636 là tên thương mại của sản phẩm do hãng Sigma cung cấp. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và tổ chức ISO không ấn định phải sử dụng sản phẩm này. Có thể sử dụng sản phẩm khác nếu chúng cho các kết quả tương đương. Каталог: data -> 2017 2017 -> Tcvn 6147-3: 2003 iso 2507-3: 1995 2017 -> Các Cục Hải quan tỉnh, thành phố 2017 -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 10256: 2013 iso 690: 2010 2017 -> Căn cứ Nghị định số 15/2017/NĐ-cp ngày 17/02/2017 của Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn và cơ cấu tổ chức của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn 2017 -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 8400-3: 2010 2017 -> TIÊu chuẩn nhà NƯỚc tcvn 3133 – 79 2017 -> Căn cứ Luật Tổ chức chính quyền địa phương ngày 19 tháng 6 năm 2015 2017 -> Căn cứ Nghị định số 15/2017/NĐ-cp ngày 17 tháng 02 năm 2017 của Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn và cơ cấu tổ chức của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn 2017 -> Btvqh10 ngày 25 tháng 5 năm 2002 của Ủy ban Thường vụ Quốc hội về tự vệ trong nhập khẩu hàng hóa nước ngoài vào Việt Nam tải về 0.57 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||