M TH9 TH10 TH11 TH12 TH13 TH14 TH15 TH16 bp

M TH9 TH10 TH11 TH12 TH13 TH14 TH15 TH16

bp

Hình 3.2.Thử nghiệm các tổ hợp mồi phù hợp (từ tổ hợp 9 đến tổ hợp 16)

Hình 3.2 cho thấy sản phẩm của các tổ hợp mồi từ 9 đến 12 đều được biểu hiện trên bản gel nhưng những vạch này rất mờ; ở tổ hợp 15 và 16, các sản phẩm hiện rõ nét hơn. Tuy nhiên, kết quả điện di sản phẩm của các cặp mồi trên đều xuất hiện những vạch DNA không đặc hiệu. Ở tổ hợp 13 và 14, sản phẩm của các cặp mồi đều biểu hiện đầy đủ và rõ nét, hơn nữa không xuất hiện sản phẩm phụ trong kết quả điện di.

Như vậy, từ các thử nghiệm trên cho thấy trong 24 tổ hợp mồi, chỉ có tổ hợp mồi 1, 2, 13 và 14 là phù hợp và cho kết quả rõ ràng khi sử dụng để phát hiện S.suis bằng phương pháp PCR đa mồi

Bảng 3.2. Các tổ hợp mồi thích hợp được lựa chọn trong thí nghiệm

Trong 4 tổ hợp mồi đáp ứng yêu cầu, nhóm nghiên cứu lựa chọn tổ hợp 1 để thực hiện các bước tối ưu hóa tiếp theo để đảm bảo tính chính xác và giảm chi phí trong quá trình thực nghiệm cũng như khi áp dụng vào thực tế.

3.1.3. Xác định điều kiện tối ưu của phản ứng PCR đa mồi phát hiện S. suis và một số yếu tố độc lực phổ biến

Bảng 3.3. Ảnh hưởng của các chu trình PCR đến khả năng phát hiện S.suis

Các điều kiện phản ứng được thử nghiệm	Ảnh hưởng tốt đến khả năng phát hiện của PCR	Không tác động đến khả năng phát hiện của phản ứng PCR
Thêm 1 bước gia nhiệt phụ lúc khởi đầu		X
Tăng thời gian bắt cặp		X
Tăng số chu kỳ chính	X
Tăng cả thời gian bắt cặp và số chu kỳ chính		X
Tăng thời gian kéo dài cuối cùng		X
Thay đổi nhiệt độ bắt cặp + lần lượt những thay đổi trên	X
Thêm chu trình nhiệt phụ (gồm đủ 3 bước gia nhiệt) trước khi vào chu trình nhiệt chính	X
Thêm chu trình nhiệt phụ, thay đổi thời gian kéo dài		X
Thêm chu trình nhiệt phụ, thay đổi thời gian bắt cặp, tăng dần số chu kỳ chính	X
Thêm chu trình nhiệt phụ, thay đổi nhiệt độ biến tính, tăng số chu kỳ chính	X

Каталог: files -> ChuaChuyenDoi
ChuaChuyenDoi -> ĐẠi học quốc gia hà NỘi trưỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Thị Hương XÂy dựng quy trình quản lý CÁc công trìNH
ChuaChuyenDoi -> TS. NguyÔn Lai Thµnh
ChuaChuyenDoi -> Luận văn Cao học Người hướng dẫn: ts. Nguyễn Thị Hồng Vân
ChuaChuyenDoi -> 1 Một số vấn đề cơ bản về đất đai và sử dụng đất 05 1 Đất đai 05
ChuaChuyenDoi -> Lê Thị Phương XÂy dựng cơ SỞ DỮ liệu sinh học phân tử trong nhận dạng các loàI ĐỘng vật hoang dã phục vụ thực thi pháp luật và nghiên cứU
ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Hà Linh
ChuaChuyenDoi -> ĐÁnh giá Đa dạng di truyền một số MẪu giống lúa thu thập tại làO
ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiêN
ChuaChuyenDoi -> TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Văn Cường

tải về 0.74 Mb.

Chia sẻ với bạn bè của bạn: