ChuyêN ĐỀ: Ứng dụng di ruyền họC
tải về 1.11 Mb. Chế độ xem pdf
|
- Điều hướng trang này:
- 3.2.3. Phản ứng cắt với sự tham gia của enzyme cắt hạn chế
| 3.2.2. Lựa chọn vector
Các gen cần chuyển thường được nhân dòng vào các vector, là các phân tử ADN nhỏ có khả năng mang được gen cần thiết. Vector dùng trong kĩ thuật ADN tái tổ hợp thường có các đặc điểm cơ bản sau: - Có điểm khởi đầu sao chép để tự sao chép trong tế bào vật chủ. - Các đoạn trình tự nhận biết cho enzyme giới hạn. Thông thường, các vector được thiết kế các vùng MCS (Multil Cloning Sites) chứa nhiều trình tự nhận biết của nhiều enzyme cắt giới hạn. - Có chỉ thị chọn lọc cho phép dễ dàng phát hiện sự có mặt của chúng trong tế bào chủ. Các chỉ thị chọn lọc có thể là một gen tổng hợp chất màu, chuyển hóa chất màu, gen gây độc hay kháng sinh. Các vector từ trường có nguồn gốc từ plasmid như pSC1001, pColE1, pBR322, pUC19, pET system, Ti-plasmid… Ngoài ra, ADN của một số hàng phage cũng được thiết kế để tạo thành một số vector như EMBL3, M13, GEM 13, GT 11…Trong một số trường hợp sự cần λ λ thiết phải có vector có khả năng mang những đoạn ADN chèn kích thước lớn, người ta đã cải tạo để hình thành một số vector nhân tạo khác như cosimd (sự kết hợp giữa plasmid và phage) hay YAC (cải tạo từ nhiễm sắc thể nấm men) hay vector từ virus của tế bào sinh vật nhân thực. Việc lựa chọn vector nhân dòng một gen cụ thể nào đó thường được xem xét nhiều yếu tố kéo theo như: Trình tự nhận biết enzyme giới hạn, khả năng nhân dòng phụ, gen chỉ thị, cách 24 thức chọn lọc dòng, sự phù hợp điểm sao chép… Người nghiên cứu cần xem xét các yếu tố liên quan trước khi chọn một vector thích hợp cho việc nhân dòng. 3.2.3. Phản ứng cắt với sự tham gia của enzyme cắt hạn chế Có thể nói enzyme giới hạn là những công cụ thực thụ để cắt các ADN. Việc cắt này xảy ra ở một vùng đặc biệt được nhận biết bởi enzyme. Mỗi một enzyme nhận biết một đoạn nucleotide khác nhau rất đặc hiệu đối với nó và được gọi là trình tự nhận biết (chuỗi đích) hay đoạn đọc ngược xuôi. Đặc trưng quan trọng nhất của các trình tự nhận biết là chúng có cấu trúc đối xứng nghịch đảo (palindromic), nghĩa là hai mạch của trình tự hoàn toàn giống nhau khi chúng được đọc theo chiều 5’ đến 3’ ở mỗi sợi đơn. Các trình tự nhận biết của enzyme giới hạn được cấu tạo từ 4 đến 6 nucleotide. tải về 1.11 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|