ChuyêN ĐỀ: Ứng dụng di ruyền họC
Giải trình tự bằng máy tự động
tải về 1.11 Mb. Chế độ xem pdf
|
| 2.4.3. Giải trình tự bằng máy tự động
Các phòng thí nghiệm hiện nay đều dùng phản ứng giải trình tự bằng phương pháp enzyme, nhưng khi tiến hành giải trình tự thường dùng các máy tự động chứ không dùng kỹ thuật phóng xạ tự ghi như trước đây. Để thực hiện giải trình tự bằng máy tự động thì các mạch ADN đơn sản sinh trong ống giải trình tự phải được đánh dấu huỳnh quang để các vạch điện di của các mạch đơn này phát sáng khi đi qua một chùm tia laser. Cấu tạo của một máy tự động giải trình tự gồm hai phần chính yếu, là phần điện di gel polyacrylamide và phần phát hiện các vạch điện di. Phần điện di polyacrylamide có thể là một phần bản gel hay là một ống mao quản chứa gel. Phần phát hiện vạch điện di là những con mắt cảm quang và một chùm tia laser đi qua trước nó. Nguyên tắc hoạt động của máy là trong suốt quá trình điện di, mỗi khi có một chùm vạch điện di đi qua chùm tia laser thì vạch điện di sẽ phát sáng lên và sự phát sáng này sẽ được con mắt cảm quang ghi nhận và lưu lại thành một đỉnh cường độ sáng trong biểu đồ. Từ biểu đồ của các đỉnh cường độ ánh sáng này, máy sẽ đo dòng của các đỉnh tương ứng với các màu để cuối cùng phân tích thành trình tự của đoạn ADN. Số mẫu chạy một lần phụ thuộc vào số mao quản của máy. Tùy thuộc vào quy mô phòng thí nghiệm cùng với số mẫu giải trình tự mà phòng thí nghiệm có thể trang bị giải trình tự ít hay nhiều mao quản. Ví dụ: Máy ABI có nhiều loại: 1, 4, 8, 16, 48 hay 96 mao quản. Một số thế hệ máy mới có những chương trình đi kèm để chẳng những có thể hiển thị tự động các ký tự hóa học của trình tự ADN mà còn giúp các nhà nghiên cứu có thể phát hiện được các chi tiết cần thiết trên trình tự như mã khởi đầu, mã kết thúc, vùng đọc mở, trình tự nhận biết 11 của enzyme cắt giới hạn, phiên dịch trình tự axit amin trong vùng đọc mở, tự động so sánh trình tự ADN trong phòng thí nghiệm hay một trình tự ADN nạp vào máy… tải về 1.11 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|