Giới thiệu công nghệ Bt kháng côn trùng
tải về 0.59 Mb.
|
| Tài liệu tham khảo
https://123docz.net/document/3625334-cay-ngo-chuyen-gen-bt.htm https://biscgroup18.weebly.com/how-does-it-work.html Phương pháp chuyển gen bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium là kí sinh trùng thực vật tự nhiên, khả năng chuyển gen vốn có của chúng đã góp phần cung cấp phương pháp cho sự phát triển của thực vật biến đổi gen. Để tạo ra môi trường sống thích hợp cho mình, các vi khuẩn Agrobacterium chèn gen của chúng vào thân cây chủ, làm tăng nhanh tế bào thực vật ở gần mặt đất (tạo khối u sần sùi). Thông tin di truyền cho sự tăng trưởng của khối u được mã hóa trên một đoạn ADN vòng có khả năng nhân bản độc lập gọi là Ti-plasmid (trên Ti-plasmid có đoạn T-ADN). Khi một vi khuẩn lây nhiễm vào thân cây, nó chuyển đoạn T-ADN này đến một vị trí ngẫu nhiên trong hệ gen của cây đó. Điều này được ứng dụng trong công nghệ di truyền bằng cách lấy đoạn gen vi khuẩn T-ADN ra khỏi các plasmid vi khuẩn và thay thế bởi các gen mong muốn bên ngoài. Các vi khuẩn Agrobacterium sau đó hoạt động như một vector chuyển tải các gen ngoại nhập vào trong thân cây. Ví dụ Ngô Bt11 được tạo ra từ dòng bố mẹ ban đầu được chuyển gen sử dụng plasmid pZO1502 mang gen kháng sâu và chống chịu thuốc diệt cỏ glufosinate ammonium, phương pháp chuyển gen dung hợp tế bào trần (protoplast transformation) sau đó tái sinh cây. Plasmid pZO1502 có nguồn gốc plasmid pUC18 được chèn 2 phân đoạn gen 35S-1/intron/BtkHD-1/nos và 35S-2/intron/pat/nos. Gen Btk là một phiên bản biến đổi của toàn bộ chiều dài gen Cry1A(b) của vi khuẩn Bacillus thurigiensis var. kurstaki chủng HD-1. Gen Btk có nguồn gốc từ phân đoạn Ncol-BglII dài 1,8 kb. Sự thay đổi gen Cry1A(b) bao gồm những thay đổi trên ADN và được xén bớt để tăng sự biểu hiện trên cây. Gen pat (phosphinothricin acetyl transferase) được dòng hoá từ vi sinh vật có trong đất Steptomyces viridochromogenes chủng Tu494. Đoạn ban đầu được thay đổi để tối thích sự biểu hiện ở thực vật. Hai gen Btk và pat đều sử dụng promoter 35S có nguồn gốc từ virus khảm bông CaMV để khởi động biểu hiện liên tục cho gen và phân đoạn IVS có nguồn gốc từ ngô để tăng cường sự biểu hiện của gen trên thực vật. Ngoài ra plasmid pZO1502 còn chứa các gen chỉ thị bla – kháng kháng sinh ampicillin, gen lacZ – mã hóa β-galactosidase có chức năng chỉ thị màu ứng dụng trong chọn lọc vi khuẩn của kỹ thuật gen. Vị trí đoạn gen được chuyển: Đoạn gen được chèn vào nằm ở dọc trên nhiễm sắc thể số 8. Số lượng bản sao của gen đưa vào: Vị trí chèn là 1 bản sao của cả gen Bt và pat và được điều khiển bởi đoạn vector 35S trên nhiễm sắc thể số 8. Véc tơ sử dụng: Plasmid PZ01502 có chứa ba gen; gen Btk (kháng sâu), gen pat (chống chịu thuốc trừ cỏ) và gen amp mang đặc tính kháng ampicilin. Plasmid được phân loại trước khi chuyển gen với enzyme hạn chế là Notl. Nó chia tách Plasmid thành hai đoạn, một mang gen Btk và pat, một đoạn khác mang gen kháng ampillicin. Vật liệu chuyển gen sau tái sinh được trồng và lai ngược/lai chéo với các dòng không chuyển gen có cùng đặc tính của công ty , sử dụng như nguồn giống lai thương mại bố mẹ. tải về 0.59 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|