ChuyêN ĐỀ: Ứng dụng di ruyền họC
tải về 1.11 Mb. Chế độ xem pdf
|
| Tên vi sinh vật
Enzyme Trình tự nhận biết Bacillus amyloliquefaciens H BamH I G/GATCC Bacillus amyloliquefaciens H BamK I G/GATCC Escherichia coli Ry 13 EcoR I G/AATTC Escherichia coli Ry 13 EcoR V GAT/ATC Haemophilus influenza Rb Hind III A/AGCTT Xanthomonas badrii Xba I T/CTAGA Streptomyces albus G Sal I G/TCGAC Xanthomonas malvaccarum Xma I CCC/GGG Streptomyces achromogenes Sac I GAGCT/C Streptomyces achromogenes Sac II CCGC/GG c. Phân loại các enzyme giới hạn Sau đó, tùy theo phương thức cắt và nguồn gốc của các enzyme đó, người ta đã chia nó thành 3 nhóm là I, II và III. (1) Enzyme giới hạn loại I có trình tự nhận biết đặc hiệu. Vị trí cắt của các enzyme loại này nằm ngoài trình tự nhận biết của một khoảng cách không nhất định, dao động từ 1.000 đến 5.000 nucleotide. Do không có tính đặc hiệu trong các đoạn nên sản phẩm của nó không đồng nhất và không phát hiện được bằng cách điện di trên gel. Phân tử lượng của chúng vào khoảng 300.000 D các bán đơn vị không giống nhau. Cần Mg 2+ làm co-factor và ATP để cung cấp năng lượng cho enzyme này chuyển động dọc theo phân tử ADN từ điểm nhận biết đến điểm cắt. Ví dụ như EcoK do Meselson và Yuan tách được, cắt ở điểm cách trình tự nhận biết 1.000 nucleotide hoặc xa hơn nữa. (2) Enzyme loại II bao gồm những enzyme có trình tự nhận biết chuỗi nucleotide đặc hiệu. Khi nhận biết được trình tự đó, chúng cắt ngay tại vị trí nhận biết. Phân tử lượng thấp hơn loại I và ở vào khoảng 20.000 đến 100.000 D. Chỉ cần Mg 2+ là co-factor và không cần năng lượng ATP. Do có tính đặc hiệu về cắt đoạn ADN nên sản phẩm thủy phân là tập hợp những đoạn ADN đặc hiệu và cho phép phát hiện bằng điện di trên gel agarose. Cho đến nay trên 1.000 loại enzyme giới hạn loại II đã được tách ra từ các tế bào sinh vật nhân sơ khác nhau và có hơn 70 loại đang được thương mại hóa trên thị trường. (3) Enzyme loại Loại III bao gồm những enzyme sau khi nhận biết một trình tự ADN đặc hiệu thì cắt ở vị trí cách đó 20 nucleotide và tạo một số đầu cắt khác nhau. Tuy rằng, vị trí điểm cắt rất gần trình tự nhận biết của chúng nhưng khó đoán trước được các điểm cắt đó. Vì vậy enzyme giới hạn loại III cũng như enzyme giới hạn loại I không được sử dụng rộng rãi trong công nghệ di truyền. Trong ba loại enzyme nói trên chỉ có enzyme giới hạn loại II được ứng dụng nhiều hơn trong công nghệ sinh học và công nghệ phân tử. tải về 1.11 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|