Việc phát triển một quy trình in vitro đáng tin cậy cũng có tầm quan trọng lớn đối với việc bảo tồn các loài thực

* Tác giả cho Thư từ
GIỚI THIỆU
42
Việc phát triển một quy trình in vitro đáng tin cậy cũng có tầm quan trọng lớn đối với việc bảo tồn các loài thực
vật quý hiếm và có nguy cơ tuyệt chủng. Hơn nữa, các dòng chịu được căng thẳng thể hiện các hoạt động bảo vệ chống
oxy hóa cao có thể được sàng lọc hiệu quả thông qua kỹ thuật này cũng như được thực hành trên các cây trồng khác
nhau thông qua gây đột biến (Hossain et al., 2007; Talukdar 2011, 2012). Tái sinh thực vật từ nuôi cấy mô của nhiều
loài thực vật đã được báo cáo, nhưng một số nhóm, họ và chi vẫn được coi là không ngoan cố (Ochatt và cộng sự,
2010). Cho đến nay, không có thông tin nào được báo cáo về khả năng tái sinh in vitro của cây A. multiflorum trong
chậu . Trong bối cảnh hiện tại, mục tiêu chính của nghiên cứu là thiết lập một
TRỪU TƯỢNG
Các từ khóa: Adenium Multiflorum Klotzsch, In Vitro, Ornamental, Regeneration, Basal Medium, PGRS
Tuy nhiên, cả hai đều là phương pháp nhân giống không hiệu quả đối với cây trong chậu, vì khả năng nảy mầm của hạt
rất kém và chất trồng không chỉ có tỷ lệ nhân giống rất thấp mà còn đòi hỏi một diện tích lớn cây dự trữ (Anderson
1983; Kanchanapoom et al. , 2010). Kỹ thuật tái sinh In Vitro đã nổi lên như một công cụ thay thế khả thi và hiệu
quả về chi phí để sản xuất nhanh vật trang trí trong những năm gần đây. Trong một nền kinh tế đang phát triển như
Ấn Độ, thị trường đồ trang trí đã tăng đều đặn trong vài năm qua (Hossain và cộng sự, 2007) và Adeniums có cơ hội
tốt để chiếm một thị phần đáng kể trong thị trường non trẻ này.
Adenium multiflorum Klotzsch là một loài thực vật cảnh có nguy cơ tuyệt chủng thuộc họ Trúc đào.
Lá non được sử dụng làm mẫu cấy cho sự phát sinh cơ quan in vitro thông qua việc gọi tên và nuôi cấy trên ba môi
trường cơ bản khác nhau-MS, B-5 và N6 có bổ sung phytohormones -α-naphthaleneacetic acid (NAA), kinetin và Gibberelic
Acid (GA). Chồi tái sinh được chuyển sang môi trường cơ bản cường độ nửa (MS, B-5 và N6) được bổ sung 2% (w / v)
sucrose, 0,8% difcobactoagar và các nồng độ khác nhau của chất điều hòa sinh trưởng - NAA và kinetin trong 1-2 tuần.
Các chồi tái sinh cũng được thử nghiệm trên môi trường cơ bản có cường độ một nửa không có chất điều hòa sinh trưởng
để tạo rễ. Các cây con đã ra rễ hoàn chỉnh ban đầu được thích nghi trong môi trường ẩm ướt và cuối cùng là trong
điều kiện nửa râm. Đây là báo cáo đầu tiên về sự tái sinh hoàn toàn của A. multiflorum từ mô sẹo thông qua hình
thành cơ quan chồi.
* Tulika Talukdar
trong nước (Ấn Độ) cũng như thị trường quốc tế. Nó có nguồn gốc từ châu Phi nhiệt đới và Ả Rập, nhưng được du nhập
và nhập tịch ở các khu vực khác nhau trên thế giới bao gồm cả Đông Nam Á (Oyen 2008). Gần đây, loài cây này đã được
đưa vào Danh sách Dữ liệu Đỏ của một số quốc gia nhiệt đới châu Phi, nơi nó được coi là bị đe dọa. Phá hủy môi
trường sống, khai thác quá mức để buôn bán dược liệu và làm vườn bất hợp pháp, và nhân giống kém trong môi trường
sống tự nhiên của chúng là những mối đe dọa chính đối với Adeniums. Ở Ấn Độ, sự quan tâm đến việc trồng nó như một
cây trồng trong chậu đang tăng lên rõ rệt do nhu cầu về cảnh quan và trang trí trong nhà ngày càng tăng (Bhattacharjee
2006). A. multiflorum có thể được nhân giống bằng hạt, giâm cành hoặc cấy ghép.
Khả năng nảy mầm của hạt kém và tỷ lệ nhân giống rất thấp của các vật liệu trồng là mối đe dọa cao đối với loại cây trồng
trong chậu này, và việc nhân giống khó khăn của nó khiến việc bảo tồn là điều cần thiết. Cuộc điều tra hiện tại là một nỗ
lực nhằm thiết lập Adenium để nhân giống vi mô và nuôi cấy phụ như một công cụ thay thế nhanh chóng, hiệu quả về chi phí.
* Khoa Thực vật học, Krishnagar Govt. Cao đẳng, Đại học Kalyani, Krishnagar, 741101, Tây Bengal, Ấn Độ
Adenium multiflorum Klotzsch, còn được gọi là Impala Lily, là một loài cây cảnh đẹp trong họ Trúc đào. Do vẻ ngoài
giống 'bon-sai' và những bông hoa có sự kết hợp rực rỡ của các màu đỏ, trắng, hồng và đỏ thẫm nên A. multiflorum đã
trở nên phổ biến rộng rãi như một loại cây cảnh
TRONG VITRO ĐĂNG KÝ CỦA MỘT HỮU CƠ ĐÃ THAY ĐỔI
CÂY IMPALA LILY (ADENIUM MULTIFLORUM KLOTZSCH)
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
Bài báo nghiên cứu
Machine Translated by Google

2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
Bài báo nghiên cứu
tăng cường với 3% (w / v) sucrose và 0,8% Difco-bactoagar. Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật (PGR) được sử dụng
là axit axetic α –naphtalen (NAA), kinetin và GA. Độ pH của môi trường được điều chỉnh đến 5,6-6,0 trước khi hấp
tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Tất cả các thí nghiệm được thực hiện trong ống nuôi cấy (150x25 mm) chứa 25-30
mL môi trường nuôi cấy. Nhiệt độ phòng nuôi cấy được duy trì ở 25 ± 1 ° C trong chu kỳ quang 16 giờ với cường độ ánh
sáng 3000 lux và độ ẩm tương đối 65-70%.
Nguyên liệu thực vật
Đối với phần lá non cảm ứng mô sẹo (dài khoảng 0,5 cm) với mặt cắt cuối được đặt tiếp xúc với môi trường nuôi cấy
có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng. Mỗi môi trường nền được bổ sung với nhiều nồng độ PGR-NAA, kinetin và GA riêng
biệt. Sau tối thiểu 20 ngày nuôi cấy, các mẫu lá được tìm thấy để tạo vết chai. Calli của các môi trường khác nhau
và có nồng độ PGR khác nhau được cấy lại sau mỗi 10-15 ngày trong ba lần liên tiếp trong cùng một chế phẩm môi
trường. Số ngày bắt đầu tạo mô sẹo, tỷ lệ phần trăm cảm ứng mô sẹo và tốc độ tăng trưởng sau đó của mô sẹo [biểu thị
bằng% khối lượng tươi (FM) tăng lên] trong quá trình nuôi cấy con được ghi lại riêng biệt cho các môi trường khác
nhau và các nồng độ PGR khác nhau. Tối thiểu 3 lần lặp lại được duy trì cho mỗi lần điều trị.
Để bắt đầu ra rễ, các chồi tái sinh (dài 2,5-4,0 cm) (Hình 1e) được nuôi cấy trên môi trường cơ bản cường độ nửa
(MS, B5 và N6) được bổ sung 2% (w / v) sucrose, 0,8% difcobactoagar và các nồng độ khác nhau của NAA và kinetin
trong 1-2 tuần. Các chồi cũng được thử nghiệm trên môi trường cơ bản có cường độ nửa cơ bản không chứa chất điều hòa
sinh trưởng. Các cây con đã ra rễ hoàn chỉnh được rửa sạch không có thạch và nhúng vào 0,2% bavistin trong 5-10
phút, sau đó được cấy vào chậu nhựa nhỏ có chứa hỗn hợp đất vô trùng, cát và than hoạt tính (1: 1: 1) để làm cứng
( Hình 1f). Ban đầu chúng được làm quen trong buồng ẩm ở độ ẩm tương đối 85% và nhiệt độ 25 ± 3 ° C có điều kiện sục
khí trong khoảng thời gian đều đặn. Sau 3 tuần làm cứng cây một lần nữa được chuyển sang chậu đất 15 cm (một
Cảm ứng và hình thành mô sẹo
Cây A. multiflorum được trồng trong chậu đất được sử dụng làm cây cho thực nghiệm. Lá non từ cây cho 3 tháng tuổi
được dùng làm mẫu cấy. Các mẫu lá được rửa kỹ dưới vòi nước chảy trong 30 phút và trong 10 phút nữa bằng dung dịch
nước Teepol 5% (v / v), sau đó rửa bằng nước cất ba lần. Teepol, một chất tẩy rửa dạng lỏng được sử dụng để loại bỏ
các hạt bụi bẩn bám trên bề mặt lá. Sau đó, lá được xử lý bằng dung dịch bavistin (một loại thuốc diệt nấm toàn
thân) trong 4-5 phút, sau đó rửa kỹ bằng nước cất vô trùng. Sau đó, các mẫu lá được nhúng nhanh (trong 30 giây)
trong etanol 70% và khử trùng bề mặt bằng dung dịch nước HgCl2 0,2% (w / v) trong 2 phút, sau đó rửa lại bằng nước
cất vô trùng. Tất cả các lá đều được cắt thành nhiều mảnh nhỏ (chiều dài khoảng 0,5-0,75 cm) và được cắt tỉa, sao
cho phần lớn nhất có thể tiếp xúc với môi trường.
Tái tạo rễ và phát triển cây con hoàn chỉnh
43
Phương tiện Văn hóa và Điều kiện Tăng trưởng
Đối với sự phát sinh cơ quan chồi, calli xanh đang phát triển tốt (Hình 1a) được cấy trên cùng một môi trường nền
(MS, B5 và N6) có chứa 3% sucrose, 0,8% difcobactoagar và được tăng cường NAA và kinetin ở các nồng độ khác nhau.
Việc điều chỉnh pH của môi trường và nồi hấp đã được thực hiện như trước đó. Tất cả các mẫu cấy được ủ ở 25 ± 1 ° C
trong chu kỳ quang 16 giờ với cường độ ánh sáng 3000 lux và độ ẩm tương đối là 65-70%. Cấy cấy được thực hiện sau
mỗi 10-15 ngày. Sau 3-4 tuần cấy ghép con, hình ảnh đầu tiên được quan sát thấy trong mô sẹo.
quy trình tái sinh cây A. multiflorum thông qua nuôi cấy mô sẹo để bỏ qua trạng thái ngủ trong hạt và cũng để đáp
ứng nhu cầu ngày càng tăng của A. multiflorum trong buôn bán hoa.
Để tìm kiếm một môi trường hiệu quả, tiềm năng tái sinh của ba môi trường cơ bản khác nhau là Murashige và Skoog
(1962), Gamborg 'B5 (Gamborg và cộng sự, 1968) và N6 (Chu và cộng sự, 1975) đã được sử dụng, mỗi
NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Bắn phát sinh cơ quan
Machine Translated by Google

-1
N6
N6
18,2 ± 3,1
-
73,4 ± 9,7
Kinetin
F-Test (Basal Media) * F-Test (Basal Media) * F-Test (PGRs) * F-Test (PGRs) *
-
GA
Bảng 1: Ảnh hưởng của các PGR khác nhau đến cảm ứng mô sẹo từ mẫu lá của Adenium multiflorum
29,0 ± 4,5 38 ± 5,2
28,1 ± 4,3 41 ± 8,5
49 ± 8,7
-
1
42,1 ± 8,7
98,0 ± 12,6
-
51 ± 8,6
KẾT QUẢ
CÔ
Cảm ứng mô sẹo (%) (Mean ± SE) a
-
37,0 ± 5,1
53 ± 9,2
79,0 ± 9,4
1
-
-
Tốc độ tăng trưởng đạt yêu cầu của calli [biểu thị bằng% khối lượng tươi (FM) của calli] đạt được trong môi
trường MS với 2 mgl-1 NAA (64%) trong lần cấy phụ thứ 3 (Hình 2a). FM của calli tăng dần trong quá trình
nuôi cấy con liên tiếp cũng thu được trong môi trường B5 với các nồng độ PGR khác nhau
GA và cao nhất trong 3 mgl-1 NAA. Môi trường N6 là ít nhất
23,2-79,0%, với mức thấp nhất là 3 mgl
cây mỗi chậu) có chứa cùng một hỗn hợp trong điều kiện bán râm để cứng lại lần cuối. Các chậu cây cứng được
duy trì trong nhà lưới ngoài trời để phát triển bình thường trong điều kiện tự nhiên.
51,2 ± 08,4
52,0 ± 8,9
PGR
20,0 ± 3,7 32 ± 4,8
-
14,2 ± 2,9
Klotzsch trong ba phương tiện cơ bản khác nhau. Tất cả dữ liệu là giá trị trung bình ± SE của ba lần lặp lại độc lập.
47 ± 8,6
1
Cảm ứng mô sẹo
2
26,3 ± 4,1
97,2 ± 11,8
23,5 ± 04,1
hiệu quả, chỉ hiển thị 14,2-24,0% kêu gọi (Bảng 1).
2
53 ± 8,8
B5
CÔ
-
44
23,0 ± 3,9 27 ± 4,2
(mg l-1 )
-
-
Phân tích thống kê
aData được lấy trong lần cấy truyền con đầu tiên. * nghĩa là khác biệt có ý nghĩa (ANOVA) ở p <0,05
-
24,0 ± 4,1
2
-
34,0 ± 04,9
22,2 ± 03,9
3
66,2 ± 9,3
23,2 ± 3,8
24,2 ± 4,2
-
Trong số ba môi trường cơ bản được sử dụng, môi trường cơ bản MS được cho là hiệu quả nhất để gọi từ
32,0 ± 4,7 47 ± 8,5
-
B5
-
-
-
3
48,0 ± 8,5
Dữ liệu được trình bày ở đây là trung bình ± sai số chuẩn (SE) của ít nhất ba lần lặp lại. Nhiều phép so
sánh các phương tiện đã được ANOVA thực hiện bằng phần mềm thống kê SPSS phiên bản 10 (SPSS Inc., Hoa Kỳ).
Xác suất P <0,05 được coi là có ý nghĩa.
89,0 ± 10,2
NAA -
32,0 ± 04,6
Số ngày bắt đầu sử dụng và tốc độ tăng trưởng sau đó trong quá trình nuôi cấy con cũng thay đổi đáng kể trong
các môi trường nền khác nhau và với các PGR khác nhau (Bảng 1). Trong môi trường MS, vết chai được quan sát
thấy tối thiểu 20 ngày sau khi bắt đầu nuôi cấy với 2 mgl-1 NAA đến tối đa 52 ngày sau khi bắt đầu nuôi cấy
với 2 mgl-1GA. Trong môi trường B5 của Gamborg, nó thay đổi từ 27 đến 53 ngày. Tuy nhiên, sự cảm ứng mô sẹo
bị trì hoãn nhiều đã được quan sát thấy trên môi trường N6 (Bảng 1).
Số ngày bắt đầu mô sẹo (Mean ± SE)
mẫu cấy lá (Hình 1a). Các mẫu cấy được nuôi cấy trên môi trường nền MS được bổ sung với các nồng độ khác
nhau của NAA, kinetin và GA cho thấy phản ứng khác nhau đáng kể đối với việc tạo mô sẹo (Bảng 1). Phần trăm
cảm ứng mô sẹo cao nhất (98%) thu được với 2 mgl-1 NAA, trong khi kinetin tạo ra tối đa 51,2% tạo mô sẹo
trên môi trường MS ở nồng độ 1 mgl-1. GA được phát hiện là kém hiệu quả nhất đối với việc tạo mô sẹo (23,5%)
(Bảng 1). Mặt khác, tỷ lệ cảm ứng mô sẹo trung bình B5 dao động
3
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Bài báo nghiên cứu
Machine Translated by Google

Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm 2012 Vol.
2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Bài báo Nghiên cứu Tulika Talukdar
Hình 1: Sự tái sinh của A. multiflorum Klotzsch. A - Mẫu cấy lá mô sẹo. B - Khởi tạo chồi ( ). C - Phân
hóa chồi. D - Bắn tái sinh. E - Tạo rễ in vitro của chồi tái sinh. F - Làm cứng ex vitro của cây con tái
sinh non. Các thanh bằng 0,5 cm ở tất cả các hình.
45
Cảm ứng rễ Ảnh
hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng khác nhau lên sự tái sinh rễ được trình bày trong Bảng 3. Số ngày
cần thiết để bắt đầu ra rễ dao động từ tối thiểu 10,5 ngày trong môi trường MS (0,5 mgl-1 NAA: 2,5 mgl-1
kinetin) đến tối đa là 43,2 ngày trong môi trường N6 (1,0 mgl-1 NAA: 2,0 mgl-1 kinetin). Trong số tất cả
các kết hợp, 0,5 mgl-1 NAA: 2,5 mgl-1 kinetin được tìm thấy là tối ưu cho cảm ứng rễ (51,2%), tạo ra số
lượng rễ / chồi cao nhất (13,8) trong môi trường MS (Hình 1e). Trong môi trường B5, 3,0 mgl-1 kinetin cùng với 0,5
Hình thành cơ quan tạo
chồi Ảnh hưởng của các PGR khác nhau đến cảm ứng chồi của A. multiflorum được trình bày trong Bảng 2. NAA
của 1 mgl-1 và 2 mgl-1 được sử dụng kết hợp với các nồng độ khác nhau của kinetin (0,5, 1,0 và 1,5 mgl-1 )
trong ba môi trường cơ bản khác nhau. Trong môi trường MS, số ngày cần thiết để tạo chồi (Hình 1b-d) sau khi
cấy vào môi trường cảm ứng chồi dao động từ 27 (trong 2,0 mgl-1 NAA: 1,5mgl-1 kinetin) đến 35 (trong 1,0
mgl-1 NAA: 1,0 mgl -1 kinetin). Ở B5, nó dao động trong khoảng từ 31 ngày đến 38 ngày. Sự tái sinh chồi bị
trì hoãn nhiều xảy ra trong môi trường N6 với yêu cầu tối thiểu là 51,2 ngày (trong 1,0 mgl-1 NAA: 1,5 mgl-1
kinetin). Trong môi trường MS, 2,0 mgl-1 NAA kết hợp với 1,5 mgl-1 kinetin được cho là tối ưu cho cảm ứng
chồi (53,9%) và số lượng chồi cao nhất trên mỗi mô sẹo phản ứng (Bảng 2). Trong môi trường B5, cả 1,0 mgl-1
và 2,0 mgl-1 NAA đều có hiệu quả tương đương nhau trong việc tạo chồi, mặc dù tỷ lệ cảm ứng chồi cao nhất
(42,1%) và số chồi được tạo ra trên mỗi mô sẹo phản ứng cao nhất (4,2 ) ở B5 ít hơn trong môi trường MS. Tuy
nhiên, trong môi trường N6 với tất cả các nồng độ NAA và kinetin, cảm ứng chồi rất kém (7,3-18,2%), cho thấy
số chồi trên mỗi mô sẹo phản ứng rất thấp (0,9-2,1) (Bảng 2).
(Hình 2b). Tốc độ tăng trưởng cao nhất của calli trong môi trường N6 chỉ là 23%, đạt được với 3 mgl-1
kinetin trong chế độ nuôi cấy phụ thứ 3 (Hình 2c).
Machine Translated by Google

a, b
Bài báo nghiên cứu
N6
N6
N6
Dữ liệu
Các mẫu cấy được nuôi cấy trên môi trường tạo chồi hoặc môi trường tạo rễ có chứa sự kết hợp tỷ lệ auxin / cytokinin
cụ thể. Thứ ba là nhận thức trong đó các mẫu cấy phát triển thành một cơ quan (De Klerk và cộng sự, 1997; Ochatt và
cộng sự, 2010).
Bảng 2: Ảnh hưởng của các PGR khác nhau đến cảm ứng chồi từ mô sẹo của Adenium multiflorum Klotzsch trong ba môi
trường nền khác nhau. Tất cả dữ liệu là giá trị trung bình ± SE của ba lần lặp lại độc lập.
Giống như mô sẹo và cảm ứng chồi, môi trường N6 có hiệu quả thấp nhất trong việc cảm ứng rễ (3,2-13,2%) so với hai
môi trường cơ bản khác được sử dụng. Tuy nhiên, tiềm năng gây rễ của cả ba môi trường cơ bản trong điều kiện không có
chất điều hòa sinh trưởng được tìm thấy là tối thiểu hoặc không đáng kể.
và 1,0 mgl-1 NAA mang lại cảm ứng rễ tối ưu (28,7-32,5%) thể hiện số lượng rễ / chồi cao nhất (7,3-7,6).
F-Test (Basal Media) * F-Test (Basal Media) * F-Test (PGRs) * F-Test (PGRs) *
Lựa chọn mẫu cấy phù hợp là rất quan trọng để tái sinh thành công. Tùy thuộc vào loài thực vật, chỉ có một số lượng
giới hạn tế bào trong mẫu cấy biểu hiện phản ứng sinh cơ quan (De Klerk và cộng sự, 1997).
THẢO LUẬN
Do đó, các mẫu cấy khác nhau từ thân rễ, lá và rễ cho thấy phản ứng khác nhau đối với cảm ứng mô sẹo (Hendrawati et
al., 2011; Banerjee et al., 2012). Trong thí nghiệm hiện tại, các mẫu cấy lá non có kích thước nhỏ hơn được sử dụng
để bắt đầu tạo vết chai do kích thước mẫu cấy nhỏ hơn ít có khả năng bị nhiễm bẩn hơn, cũng như các lá lớn hơn cho
thấy mất toàn bộ tiềm năng hình thái / sinh vật (Mujib 1997). Không có môi trường N6 , sự khởi đầu của calli từ các
mẫu cấy lá không gây ra vấn đề lớn trong vật liệu hiện tại. Trong môi trường N6 (được bổ sung NAA, kinetin hoặc GA,
các đoạn lá vẫn xanh trong thời gian dài với quá trình cảm ứng / phát triển mô sẹo rất chậm. Môi trường cơ bản MS cho
thấy các phản ứng khác nhau về sự tái tạo mô sẹo khi được bổ sung
46
được thực hiện sau 20 ngày kể từ khi hình thành chồi đầu tiên . * Giá trị trung bình khác biệt có ý nghĩa (ANOVA) ở p
<0,05
Lần đầu tiên, một quy trình tái sinh in vitro (tạo cơ quan) thành công đã được phát triển trong Adenium multiflorum
Klotzsch. Nói chung, có thể phân biệt ba giai đoạn trong quy trình này. Đầu tiên là sự khác biệt hóa trong đó mô trở
nên có đủ năng lực để đáp ứng với kích thích sinh cơ. Nó thường được bắt đầu bằng cách nuôi cấy trên môi trường tạo
mô sẹo giàu auxin và có thể kéo theo một giai đoạn phát triển mô sẹo. Thứ hai là cảm ứng trong đó các tế bào được xác
định để hình thành rễ hoặc chồi.
35,0 ± 4,7 34,0 ± 4,4 57,0 ± 5,9 41,3 ± 5,1 34,2 ± 4,2 12,8 ± 1,9 6,7 ± 0,71 3,3 ± 0,41 2,1 ± 0,29
(Trung bình ± SE)
CÔ
34,0 ± 4,4 36,2 ± 4,5 51,2 ± 6,1 48,1 ± 5,5 33,4 ± 4,1 15,9 ± 2,2 6,9 ± 0,74 4,2 ± 0,52 1,2 ± 0,21
27,0 ± 3,2 33,5 ± 4,2 55,7 ± 6,1 53,9 ± 5,9 36,7 ± 4,5 18,2 ± 2,5 9,4 ± 0,98 2,5 ± 0,16 2,0 ± 0,25
1,0
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
Bắn chồi
1,5
(Trung bình ± SE) b
(Trung bình ± SE) a
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Kinetin
0,5
Bud / Callus đã phản hồi
B5
32,0 ± 4,2 38,0 ± 4,9 59,0 ± 6,2 38,2 ± 4,5 38,7 ± 4,5 7,3 ± 0,85 5,2 ± 0,65 2,4 ± 0,18 1,3 ± 0,22
28,0 ± 3,4 31,0 ± 4,1 59,2 ± 5,6 53,3 ± 5,8 42,1 ± 5,0 13,3 ± 1,8 6,3 ± 0,70 4,1 ± 0,50 1,2 ± 0,14
PGR
1,0
B5
1,5
% Sản xuất Callus
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
NAA 2+
NAA
(mg l-1 ) MS
B5
1+
Kinetin
Số lần bắn
CÔ
0,5
31,0 ± 4,1 34,0 ± 4,4 63,2 ± 6,9 48,1 ± 5,4 37,3 ± 4,4 9,2 ± 1,1 6,2 ± 0,69 2,7 ± 0,31 0,9 ± 0,08
Số ngày để tái sinh
Machine Translated by Google

1
Bài báo nghiên cứu
N6
-1
N6
N6
Sự hình thành khối tế bào thực vật vô tổ chức (mô sẹo) trong môi trường chắc chắn được kiểm soát bởi các chất điều
hòa sinh trưởng (auxin, cytokinin) có trong môi trường (Shah và cộng sự, 2003). Nồng độ cụ thể của các chất điều
hòa thực vật cần thiết để tạo ra mô sẹo, thay đổi tùy theo loài, trung bình đến trung bình và thậm chí phụ thuộc
vào nguồn mẫu cấy (Charriere et al., 1999). Ở A. multiflorum, tỷ lệ tạo mô sẹo đạt yêu cầu (89-98%) thu được trong
môi trường MS được tăng cường các auxin như NAA, và đáp ứng thấp hơn một chút trong môi trường B5 (66-79%). Trong
nhiều trường hợp, người ta đã quan sát thấy rằng 2, 4-D là sự lựa chọn của các auxin để cảm ứng mô sẹo và nuôi cấy
phụ của cỏ (Bhaskaran
có thể cần cytokinin. Sự kết hợp giữa cytokinin và auxin không tạo ra phản ứng tốt hơn ở A.
Bảng 3: Ảnh hưởng của các PGR khác nhau đến cảm ứng rễ của Adenium multiflorum Klotzsch trong ba môi trường cơ bản
khác nhau. Tất cả dữ liệu là giá trị trung bình ± SE của ba lần lặp lại độc lập. a, bData được thực hiện sau 10
ngày kể từ ngày ra rễ đầu tiên . * Giá trị trung bình khác biệt có ý nghĩa (ANOVA) ở p <0,05
NAA, kinetin hoặc GA, và là hiệu quả nhất để tạo vết thương trên mẫu cấy lá cũng được hỗ trợ bởi Sehrawat và cộng
sự. (2001).
và Smith 1990; Chaudhury và Qu 2000). Nghiên cứu hiện tại chứng minh thêm rằng trong môi trường bổ sung kinetin
nồng độ thấp (1,0 mgl-1 ), cảm ứng mô sẹo có ý nghĩa hơn (51,2% trong môi trường MS và 42,1% trong môi trường B5)
so với các nồng độ cao hơn như 2,0 và 3,0 mgl- 1
của kinetin. Điều này được ghi nhận lần đầu tiên trong Adenium và vẫn phù hợp với các kết quả thí nghiệm trước đó
trên cỏ lúa mạch đen và cỏ cao (Alpeter và Posselty 2000; Bai và Qu 2001; Bradely và cộng sự, 2001), chỉ ra rằng
việc bổ sung một nồng độ thấp của cytokinin trong môi trường nuôi cấy mô sẹo thường tăng cường tái sinh mô sẹo. Sự
phát triển sau đó của mô sẹo trong môi trường, được biểu thị bằng phần trăm FM tăng lên, nhanh hơn trong vật liệu
hiện tại với việc nuôi cấy mô sẹo thường xuyên, có thể
47
loại trừ phenol không mong muốn hoặc các hợp chất khác do các mô thực vật thải ra môi trường đạt nồng độ ức chế
(Pan và Van Staden 1998).
F-Test (Basal Media) * F-Test (Basal Media) * F-Test (PGRs) * F-Test (PGRs) *
Đánh giá PGRs trong thí nghiệm hiện tại cho thấy NAA như một auxin và kinetin như một cytokinin có lợi trong cả
môi trường cơ bản MS và B5 để tạo chồi tối ưu cho A. multiflorum. Tỷ lệ mô sẹo tạo chồi chồi cao nhất là 53,9%
trên môi trường MS có bổ sung 2,0 mgl NAA: 1,5 mgl-1 kinetin. Sự hình thành chồi với tần suất cao và tái sinh cây
cũng đạt được ở Dianthus chinensis, khi môi trường nuôi cấy chứa cả cytokinin và auxin (Kantia và Kothari 2002).
Tuy nhiên, ở A. obesum, sự hiện diện của BA (như cytokinin) trong môi trường dường như là tối ưu cho cảm ứng chồi
(Kanchanpoom và cộng sự, 2010). Điều này cho thấy rằng sự hình thành chồi ở Adeniums
NAA
NAA
B5
0,5 +
1.0+
3.0
Ngày bắt đầu gốc rễ
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
% Cảm ứng gốc
2.0
CÔ
21,0 ± 3,1 24,0 ± 3,4 43,2 ± 4,9 25,2 ± 3,4 11,1 ± 2,1 4,1 ± 0,52 5,0 ± 0,59 2,4 ± 0,31 2,1 ± 0,28
(Trung bình ± SE)
(Trung bình ± SE) a
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
CÔ
11,5 ± 1,2 26,2 ± 3,5 31,2 ± 4,1 44,5 ± 5,5 28,7 ± 3,6 13,2 ± 2,2 10,2 ± 1,4 7,6 ± 0,83 2,7 ± 0,31
11,2 ± 2,2 23,5 ± 3,2 35,7 ± 4,1 46,4 ± 5,2 32,5 ± 4,2 9,7 ± 1,2 11,4 ± 1,5 7,3 ± 0,86
(mg l
3.0
2,5
Số lượng rễ / chồi (Mean ± SE)
b
Kinetin
Kinetin
PGR
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
15,3 ± 1,9 28,0 ± 3,9 39,0 ± 4,2 12,5 ± 2,0 13,2 ± 2,2 3,2 ± 0,45 4,2 ± 0,55 3,1 ± 0,21 1,5 ± 0,22
B5
18,0 ± 2,4 21,0 ± 3,1 39,2 ± 3,6 37,5 ± 4,3 23,2 ± 3,1 7,3 ± 0,81 8,3 ± 0,70 5,2 ± 0,50 2,8 ± 0,31
10,8 ± 1,4 24,0 ± 3,4 37,0 ± 3,9 51,2 ± 6,1 24,5 ± 3,2 9,5 ± 1,1 13,8 ± 2,4 7,2 ± 0,81 2,1 ± 0,29
3,2 ± 0,41
B5
2,5
2.0
) CÔ
Machine Translated by Google

multiflorum dễ dàng đạt được đối với tất cả các nghiệm thức NAA và kinetin trong cả môi trường cơ bản MS và B5,
mặc dù mức kinetin cao hơn được coi là tối ưu cho quá trình tái sinh trong ống nghiệm của chồi ở loài cây cảnh đang
bị đe dọa này.
các môi trường khác nhau bổ sung ba PGR-NAA, Kinetin và GA khác nhau ở các nồng độ 1 mgl-1 , 2 mgl-1 và 3 mgl-1 .
,
(George 1996). Trong vật liệu hiện tại, đã có sự gia tăng đáng kể về số lượng chồi ở mức kinetin cao hơn (1,5
mgl-1 ). Các lá khỏe mạnh với màu xanh lục và không có bất kỳ dấu hiệu nào của quá trình thủy tinh hóa (Hình 1d-f).
Như vậy, từ kết quả trên có thể suy ra cảm ứng tạo chồi của A.
obesum hơn cytokinin đơn thuần. Điều này có thể là do sự khác biệt về mức độ nội sinh của các chất điều hòa sinh
trưởng hoặc sự khác biệt về độ nhạy cảm với các chất tăng trưởng (Trewawas và Cleland 1983). Các kết quả thí nghiệm
hiện tại đồng tình với quan điểm rằng có sự khác biệt về tiềm năng phát sinh cơ quan giữa các họ thực vật, chi,
loài và thậm chí cả các kiểu gen khác nhau của một loài
được tạo điều kiện bởi nồng độ muối giảm (một nửa hoặc một phần tư) trong môi trường nuôi cấy (Rout và cộng sự,
2000), mặc dù ở Gomortega keule (cây Chilê) không có lợi thế về việc giảm nồng độ muối trong rễ (Munoz-concha và
Davey 2011). Sự ra rễ cao nhất trong vật liệu hiện tại đã được quan sát thấy ở
Hình 2: Phần trăm tăng khối lượng tươi (FM) của calli trong lần đầu tiên
0,5mgl-1 NAA: 2,5 mgl-1 kinetin cho môi trường MS và 1,0 mgl-1 NAA: 3,0 mgl-1 kinetin cho môi trường B5.
Kết quả cho thấy A. multiflorum yêu cầu sự hiện diện của cả auxin và cytokinin trong môi trường để cảm ứng rễ, và
do đó khác biệt rõ ràng với A. obesum không yêu cầu sự hiện diện của auxin trong môi trường để cảm ứng rễ
(Kanchanpoom et al., 2010).
48
A - trên môi trường MS. B - trên môi trường B5. C - trên môi trường N6 .
Văn hóa phụ thứ 2 và thứ 3 trên
Những cây đã ra rễ hoàn toàn ban đầu được làm cứng trong buồng ẩm và cuối cùng trong nhà lưới ngoài trời ở điều
kiện bình thường (Hình 1f). Cho than hoạt tính vào hỗn hợp bầu tạo điều kiện thuận lợi
Sự cảm ứng của rễ được cho là then chốt để hình thành cây con hoàn chỉnh. Các chồi tái sinh thu được từ môi trường
cảm ứng chồi không tạo ra rễ trong cùng môi trường (cường độ đầy đủ). Tuy nhiên, khi các chồi dài 2,5-4,0 cm được
đặt trên môi trường cơ bản có cường độ một nửa MS và B5 có bổ sung NAA và kinetin, rễ sẽ hình thành trong vòng
10-12 ngày (Hình 1e). Ở một số cây thân gỗ, sự ra rễ là
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
Bài báo nghiên cứu
Machine Translated by Google

Văn hóa 60 113-120.
179-183.
Charriere F, Sotta B, Miginiac E và Hahne G (1999). Cảm ứng chồi bất định hoặc phôi soma trên nuôi cấy in vitro . Sinh
lý thực vật Hóa sinh 37 (10) 752-757.
49
Tỷ lệ sống của cây con là 70-72% trong điều kiện quang chu kỳ tự nhiên. Do đó, các cây con A. multiflorum thu được có
kiểu hình bình thường trong quá trình phát triển sinh dưỡng tiếp theo.
Alpeter F và Posselt Vương quốc Anh (2000). Cải thiện khả năng tái sinh từ huyền phù tế bào của các giống cây trồng
thương mại nhân giống và trong các dòng đã lai tạo của cỏ lúa mạch đen lâu năm (Lolium perenne L.). Tạp chí Sinh lý thực
vật 156 790-796.
Năm 18659-668 của Scientia Sinica .
Banerjee P, Maity S và Banerjee N (2012). Sự phát sinh phôi soma tần số cao và tái sinh cây con của Bauhinia variegata,
một cây họ đậu đa chức năng. Tạp chí Ấn Độ về Khoa học Đời sống Cơ bản và Ứng dụng 2 (2) 87-95.
Quy trình vi nhân giống được phát triển ở đây cũng rất phù hợp vì việc nhân giống bằng hạt bị hạn chế ở loại cây này.
Cuối cùng, việc nhân giống hạt giống không duy trì được tính đồng nhất / tính chung thủy của gen, điều này là tối quan
trọng. Do đó, việc tái sinh thông qua nuôi cấy mô sẹo sẽ tạo cơ sở cho việc cải thiện di truyền của Adeniums bằng các
công nghệ nhân giống thông thường và tế bào soma. Cần tối ưu hóa hơn nữa để tăng hiệu quả và tần suất tái sinh cũng như
giảm tổng thời gian tái sinh.
Anderson AH (1983). Thụ phấn bằng tay thuộc họ Trúc đào. Tạp chí Cactus and Succulent (Mỹ) 55 252-
Bhattacharjee SK (2006). Những tiến bộ trong nghề làm vườn trang trí, tập 1. Công ty Cổ phần Sách Phương Đông, Ấn Độ.
George EF (1996). Nhân giống cây trồng bằng nuôi cấy mô tế bào: Phần 2 - Trong thực tế. Exegetics Ltd., Basingstoke, Anh.
Babu K, Sajina A, Minoo D, John C, Mini P, Tushar K, Rema J và Ravindran P (2003).
Chaudhury A và Qu R (2000). Hình thành phôi soma và tái sinh thực vật của cây bermudagrass loại truf: tác dụng của 6-
Benzaldehyde trong môi trường cảm ứng mô sẹo. Mô và cơ quan tế bào thực vật
tái sinh chervil hoang dã (Anthriscus sylvestris L.). Sinh học tế bào & phát triển trong ống nghiệm –Plant
tiếp tục ra rễ của các cây A. multiflorum tái sinh trong quá trình cứng hóa. Kết quả tương tự cũng được quan sát thấy ở
nhiều cây cảnh trong chậu (Rout và cộng sự, 2000), Cinnamomum camphera (Babu và cộng sự, 2003), v.v., và
Kết luận, đây là báo cáo đầu tiên về khả năng tái sinh của cây A. multiflorum trong ống nghiệm. Các
Bai Y và Qu R (2001). Các yếu tố ảnh hưởng đến sự đáp ứng của quá trình nuôi cấy mô của hạt trưởng thành và phôi chưa
trưởng thành ở cây cỏ cao (Festuca arundinacea schreb.). Giống cây trồng 120 239-242.
Chu CC, Wang CC, Sun CS, Hsu KC, Yin KC, Chu CY và Bi FY (1975). Thiết lập môi trường hiệu quả cho một giống lúa khác
thông qua các thí nghiệm so sánh trên các nguồn nitơ.
NGƯỜI GIỚI THIỆU
Bhaskaran S và Smith RH (1990). Tái sinh trong nuôi cấy mô ngũ cốc: Một đánh giá. Khoa học cây trồng 30
De Klerk G, Arnholdt-Schmitt B, Lieberei R và Neumann KH (1997). Tái sinh rễ, chồi và phôi: Các khía cạnh sinh lý, sinh
hóa và phân tử. Bộ phận sinh học 39 53-66 .
1328-1336.
Gamborg OL, Miller RA và Ojima K (1968). Nhu cầu dinh dưỡng của dịch nuôi cấy huyền phù tế bào rễ đậu tương. Nghiên cứu
tế bào thực nghiệm 50 151-158.
254.
Bradley DE, Bruneau AH và Qu R (2001). Tác dụng của giống cây trồng. xử lý mẫu cấy và chất bổ sung môi trường về cảm ứng
mô sẹo và tái sinh cây con trên cỏ lúa mạch đen lâu năm. Tạp chí Nghiên cứu của Hiệp hội Cỏ Cỏ Quốc tế 9 152-156.
Hendrawati O, Hille J, Herman J, Woerdenbag HJ, Quax WJ và Kayser O (2011). Trong ống nghiệm
đã đề cập rằng than hoạt tính có thể hấp thụ các chất điều hòa sinh trưởng và các chất thải do thực vật thải ra hoặc tạo
ra bóng tối một phần tương tự như môi trường dưới đất, do đó làm tăng sự ra rễ.
Nhân giống cây long não (Cinnamomum camphora). Nuôi cấy mô và cơ quan tế bào thực vật 74
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Bài báo nghiên cứu
Machine Translated by Google

Muñoz-Concha D và Davey MR (2011). Nhân giống cây Chilê có nguy cơ tuyệt chủng, Gomortega keule. Sinh học tế
bào & phát triển trong ống nghiệm - Cây 47 170-175 .
Ochatt SJ, Atif RM, Patat-Ochatt EM, Jacas L và Conreux C (2010). Năng lực so với khả năng tái sinh trong ống
nghiệm. Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj - Napoca 38 102-108.
50
Murashige T và Skoog F (1962). Một môi trường sửa đổi để tăng trưởng nhanh và xét nghiệm sinh học với nuôi cấy
mô thuốc lá. Sinh lý thực vật 15 473–497.
Trewavas AJ và Cleland RE (1983). Sự phát triển của thực vật được điều chỉnh bởi sự thay đổi nồng độ chất sinh
trưởng hay sự thay đổi độ nhạy? Xu hướng Khoa học Hóa sinh 8 354-357.
Talukdar D (2012). Đột biến asfL1 bán lùn thiếu ascorbate của Lathyrus sativus thể hiện những thay đổi trong
việc bảo vệ chống oxy hóa. Biologia Plantarum 56 (4) 675-682.
Pan MJ và Van Staden J (1998). Việc sử dụng than củi trong nuôi cấy in vitro - một đánh giá. Quy chế sinh trưởng
của thực vật 26 155-163.
Hossain Z, Mandal AKA, Datta SK và Biswas AK (2007). Phát triển dòng chống chịu NaCl trên cây Cúc dại Morifolium
Ramat. thông qua sự phát sinh cơ quan chồi của dòng mô sẹo đã chọn. Tạp chí Công nghệ Sinh học 129 658–667.
Kanchanapoom K, Sunheem S và Kanchanapoom K (2010). Tuyên truyền trong ống nghiệm của Adenium
Oyen LPA (2008). Adenium obesum (Forssk.) Roem. & Schult. Trong: Tài nguyên thực vật của châu Phi nhiệt đới,
cây thuốc, được biên tập bởi Schmelzer GH và Gurib Fakim A (Backhuys, Wageningen) Tài nguyên thực vật của châu
Phi nhiệt đới, cây thuốc.
obesum (Forssk.) Roem. và Schult. Notulae Botanicae Horti Agrobotanici Cluj-Napoca 38 209-213.
Sehrawat AR, Sanjogta U và Punja A (2001). Nuôi cấy trong ống nghiệm và nhân giống Rouwolfia serpentine- Một
loài cây thuốc đang bị đe dọa. Nghiên cứu cây trồng 22 (1) 68-71.
Kantia A và Kothari SL (2002). Hiệu quả cao sự hình thành chồi bất định và tái sinh cây từ mẫu lá Dianthus
chinensis L. Scientia Horticulturae 96 205-212.
Rout GA, Mohapatra A và Jain SM (2000). Nuôi cấy mô của cây trồng trong chậu cảnh: một đánh giá quan trọng về
kịch bản hiện tại và triển vọng trong tương lai. Biotechnol Adv 24 531-560.
Mujib A, Das S và Dey S (1997). Nuôi cấy tế bào miễn phí, tổ chức và tái sinh thực vật ở Santalum
Talukdar D (2011). Phân lập và xác định đặc điểm của các đột biến chống chịu NaCl ở hai cây họ đậu quan trọng,
Clitoria ternatea L. và Lathyrus sativus L.: Gây đột biến và chọn lọc bằng stress mặn. Tạp chí Nghiên cứu Cây
thuốc 5 (16) 3619-3628.
album L. Nuôi cấy mô thực vật 7 63-69.
Shah MI, Jabeen M và Ilahi I (2003). Cảm ứng mô sẹo in vitro , sự tăng sinh và tái sinh của nó trong các mẫu
hạt giống của cây Lúa mì (Triticum aestivum L.) var. Lu-26S. Tạp chí Thực vật học Pakistan 35 (2) 209-217.
Tạp chí Khoa học Đời sống Ứng dụng và Cơ bản Ấn Độ ISSN: 2231-6345 (Trực tuyến)
Một Tạp chí Quốc tế Trực tuyến Có tại http://www.cibtech.org/jls.htm
2012 Vol. 2 (3) Tháng Bảy-Tháng Chín, trang 42-50 / Tulika Talukdar
Bài báo nghiên cứu
Machine Translated by Google