Công nghệ sinh họC ĐỘng vậT
tải về 4.64 Mb.
|
|
LY TRÍCH DNA TỪ GAN BÒ * Quy trình thực hiện: 1a. Mẫu mô hoặc mẫu sinh thiết: Mẫu mô được cắt nhỏ và cho vào tube 1.5 mL cùng với 200 µL TL buffer và 20 µL Proteinase K. Nghiền mẫu bằng chày cho đến khi nát mẫu, vortex đều và ủ ở 72°C cho đến khi mẫu ly giải hoàn toàn. Chú ý vortex thường xuyên trong quá trình ủ. 1b. Tế bào, vi khuẩn nuôi cấy: Ly tâm dịch nuôi cấy ở tốc độ 13.000 rpm trong 5 phút, đồ bỏ môi trường nuôi cấy và huyền phù trong 200 µL PBS Buffer. Thêm 20 µL Proteinase K và chuyển sang bước 2. 1c. Mẫu huyễn dịch (huyền phủ): Huyễn dịch nên được chuẩn bị trong PBS Buffer. Sau đó, sử dụng 200 µL huyễn dịch cho vào tube 1.5 ml. Thêm 20 µL Proteinase K và chuyển sang bước 2. 1d. Mẫu quét bề mặt: Mẫu sau khi quét bề mặt được đồng nhất trong PBS Buffer. Sau đó, sử dụng 200 µL cho vào tube 1.5 ml. Thêm 20 µL Proteinase K và chuyển sang bước 2. 1e. Mẫu dịch phết: Tùy thuộc loại mẫu sẽ có cách bảo quản và xử lý khác nhau. Mẫu sau khi xử lý, sử dụng 200 µL cho vào tube 1.5 ml. Thêm 20 µL Proteinase K và chuyển sang bước 2. 2. Thêm 200 µL CL buffer, vortex đều và ủ 72°C trong 10 phút. (Chú ý: Đối với trường hợp sử dụng chứng nội (IC) để kiểm soát quá trình tách chiết thì IC được cho vào cùng với mẫu ở bước này.) 3. Thêm 200 µL Ethanol (96-100%), trộn đều và chuyển hỗn hợp sang cột silica đặt sẵn trong tube 2 mL. Ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút. Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. 4. Đặt lại cột vào tube 2 mL cũ. Thêm 500 µL WB1 buffer và ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút. Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. 5. Đặt lại cột vào tube 2 mL cũ. Thêm 500 µL WB2 buffer và ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút. Giữ lại cột và loại bỏ phần chất lỏng bên dưới. 6. Đặt lại cột vào tube 2 mL cũ. Làm khô cột bằng cách ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút. 7. Chuyển cột sang tube 1.5 mL mới. Thêm 50 µL EB buffer và ủ một phút ở nhiệt độ phòng. Ly tâm ở tốc độ 13,000 rpm trong 1 phút, thu phần dịch chứa DNA bên dưới. 8. DNA thu được sử dụng ngay hoặc bảo quản ở - 20 ^ 0 * C tải về 4.64 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|