TuyÓn tËp tiªu chuÈn phn bãn Nhãm B
tải về 61.53 Kb.
|
- Điều hướng trang này:
- Anaerobic nitrogen fixing and cellulotic degradating biofertylizer
- B¶ng 1 : Sè lîng bao (tói) cÇn lÊy ®Ó kiÓm tra
- Phô lôc
tuyÓn tËp tiªu chuÈn ph©n bãn Nhãm B
1. Ph¹m vi ¸p dông: Tiªu chuÈn nµy ¸p dông cho viÖc kiÓm tra mËt ®é c¸c vi sinh vËt cã kh¶ n¨ng cè ®Þnh nit¬ hoÆc ph©n gi¶i xenlulo kÞ khÝ trong ph©n bãn vi sinh vËt. 2. ThuËt ng÷, ®Þnh nghÜa: 2.1. Ph©n vi sinh vËt (gäi t¾t lµ ph©n vi sinh) lµ s¶n phÈm chøa mét hay nhiÒu chñng vi sinh vËt sèng h÷u Ých ®· ®îc tuyÓn chän cã mËt ®é ®¹t theo tiªu chuÈn hiÖn hµnh th«ng qua c¸c ho¹t ®éng sèng cña chóng trong ®Êt t¹o nªn chÊt dinh dìng mµ c©y trång cã thÓ sö dông ®îc (N, P, K) hay c¸c ho¹t chÊt sinh häc, gãp phÇn n©ng cao n¨ng suÊt vµ chÊt lîng n«ng s¶n. Ph©n vi sinh vËt kh«ng g©y ¶nh hëng xÊu ®Õn chÊt lîng n«ng s¶n, ngêi, ®éng vËt, thùc vËt vµ m«i trêng sinh th¸i. 2.2. Ph©n vi sinh vËt kÞ khÝ cè ®Þnh nit¬ lµ s¶n phÈm chøa mét hay nhiÒu chñng vi sinh vËt sèng, ®· ®îc tuyÓn chän víi mËt ®é ®¹t theo tiªu chuÈn hiÖn hµnh, cã kh¶ n¨ng cè ®Þnh nit¬ trong ®iÒu kiÖn kÞ khÝ, t¹o ®iÒu kiÖn n©ng cao n¨ng suÊt hoÆc chÊt lîng s¶n phÈm. C¸c chñng vi sinh vËt nµy kh«ng ¶nh hëng xÊu ®Õn ngêi, ®éng vËt, thùc vËt, m«i trêng sinh th¸i vµ chÊt lîng n«ng s¶n. 2.3. Ph©n vi sinh vËt kÞ khÝ ph©n gi¶i xenlulo lµ s¶n phÈm chøa mét hay nhiÒu chñng vi sinh vËt sèng, ®· ®îc tuyÓn chän víi mËt ®é ®¹t theo tiªu chuÈn hiÖn hµnh, cã kh¶ n¨ng ph©n gi¶i xenlulo trong ®iÒu kiÖn kÞ khÝ, t¹o ®iÒu kiÖn n©ng cao n¨ng suÊt hoÆc chÊt lîng s¶n phÈm. C¸c chñng vi sinh vËt nµy kh«ng ¶nh hëng xÊu ®Õn ngêi, ®éng vËt, thùc vËt, m«i trêng sinh th¸i vµ chÊt lîng n«ng s¶n. 2.4. Vi sinh vËt ®· ®îc tuyÓn chän lµ vi sinh vËt ®· ®îc nghiªn cøu, ®¸nh gi¸ ho¹t tÝnh sinh häc vµ hiÖu qu¶ ®èi víi ®Êt, c©y trång dïng ®Ó s¶n xuÊt ph©n vi sinh vËt. 2.5. Vi sinh vËt t¹p lµ vi sinh vËt cã s½n trong ph©n vi sinh vËt nhng kh«ng thuéc lo¹i vi sinh vËt ®· ®îc tuyÓn chän. 3. Néi dung, ph¬ng ph¸p: 3.1. Trang thiÕt bÞ:
+ Tñ nu«i kÞ khÝ + B×nh ch©n kh«ng + B×nh nu«i kÞ khÝ: Gas Pak 3.2. TiÕn hµnh: 3.2.1. ChuÈn bÞ dông cô: C¸c dông cô lÊy mÉu vµ dông cô dïng trong x¸c ®Þnh vi sinh vËt ph¶i tiÖt trïng b»ng mét trong c¸c ph¬ng ph¸p díi ®©y:
3.2.2. ChuÈn bÞ m«i trêng: 3.2.2.1.M«i trêng dïng ®Ó kiÓm tra ph©n vi sinh vËt kÞ khÝ cè ®Þnh nit¬, ph©n gi¶i xenlulo phô thuéc vµo chñng lo¹i vi sinh vËt mµ nhµ s¶n xuÊt sö dông. NÕu kh«ng cã yªu cÇu cña nhµ s¶n xuÊt, khi kiÓm tra sö dông m«i trêng ( phô lôc kÌm theo). M«i trêng ®îc pha chÕ theo thø tù c¸c ho¸ chÊt trong thµnh phÇn ®· cho. Sau ®ã ph©n phèi vµo c¸c dông cô thuû tinh ®· chuÈn bÞ tríc råi khö trïng ë nh÷ng ®iÒu kiÖn phï hîp. §Ó nguéi m«i trêng ®Õn 45-500C råi ph©n phèi vµo c¸c ®Üa petri v« trïng. Thao t¸c nµy ®îc thùc hiÖn trong ®iÒu kiÖn v« trïng. KiÓm tra ®é s¹ch cña m«i trêng sau 2 ngµy ë nhiÖt ®é tõ 28 ®Õn 300C. ChØ sö dông c¸c ®Üa petri chøa c¸c m«i trêng nu«i cÊy vi sinh vËt kh«ng ph¸t hiÖn thÊy t¹p nhiÔm. 3.2.2.2. DÞch pha lo·ng lµ níc muèi sinh lý (NaCl 0,85%), kh«ng chøa c¸c hîp chÊt nit¬, sau khi khö trïng cã ®é pH lµ 7,0. Ph©n phèi dÞch pha lo·ng vµo c¸c èng nghiÖm, b×nh tam gi¸c cã dung tÝch thÝch hîp víi mét lîng sao cho sau khi khö trïng, mçi èng nghiÖm chøa 9ml, mçi b×nh tam gi¸c chøa 90ml. Lµm nót b«ng vµ khö trïng ë 1 at (1210C) trong 30 phót. NÕu cha sö dông ngay, dÞch pha lo·ng cÇn ®îc b¶o qu¶n trong tñ l¹nh ë nhiÖt ®é 4-100C, thêi gian b¶o qu¶n kh«ng qu¸ 1 th¸ng kÓ tõ ngµy chuÈn bÞ. Ghi chó: §Ó tr¸nh lµm ¶nh hëng ®Õn c¸c vi sinh vËt do thay ®æi nhiÖt ®é ®ét ngét, nªn ®iÒu chØnh nhiÖt ®é cña dÞch pha lo·ng ®Õn nhiÖt ®é phßng thö nghiÖm tríc khi sö dông. 3.2.3. LÊy mÉu: 3.2.3.1. Qui ®Þnh chung: ViÖc lÊy mÉu ®îc tiÕn hµnh sao cho mÉu kiÓm tra ph¶i lµ mÉu ®¹i diÖn cho c¶ l« hµng. Ngêi lÊy mÉu ph¶i ®îc huÊn luyÖn vµ cã kinh nghiÖm trong viÖc lÊy mÉu. Trong qu¸ tr×nh lÊy mÉu, vËn chuyÓn vµ xö lý mÉu, ph¶i ®¶m b¶o tr¸nh sù l©y nhiÔm tõ bªn ngoµi vµ ph¶i ®¶m b¶o lµ mÉu ph¶i ®îc gi÷ nguyªn tr¹ng nh ban ®Çu cho tíi khi ®em ph©n tÝch trong phßng thÝ nghiÖm. Kh«ng ®îc bæ sung thªm bÊt cø mét t¸c nh©n b¶o qu¶n, diÖt khuÈn hoÆc diÖt nÊm nµo vµo mÉu kiÓm tra. MÉu ®îc lÊy ph¶i tõ c¸c bao nguyªn gãi. Ph¶i tiÕn hµnh lÊy mÉu ë nh÷ng n¬i kh«ng cã h¬i níc nãng, ho¸ chÊt ®éc h¹i, kh«ng cã ¸nh n¾ng gay g¾t hoÆc bôi vµ ®îc ®a ngay vµo dông cô chøa mÉu. C¸c dông cô lÊy mÉu vµ chøa mÉu ph¶i v« trïng. 3.2.3.2. Sè lîng mÉu: L« hµng bao gåm c¸c bao (tói) ®îc s¶n xuÊt cïng mét ®ît víi cïng mét nguån nguyªn liÖu. Sè lîng bao (tói) cÇn lÊy ®Ó kiÓm tra ®èi víi mçi l« hµng phô thuéc vµo ®é lín cña l« hµng ®ã vµ phï hîp víi qui ®Þnh trong b¶ng 1 B¶ng 1: Sè lîng bao (tói) cÇn lÊy ®Ó kiÓm tra
C¸c bao (tói) mÉu ®îc lùa chän ngÉu nhiªn theo TCVN 1964-75 TiÕn hµnh lÊy mÉu trung b×nh tõ mÉu chung lµ tËp hîp c¸c mÉu ban ®Çu trong l« hµng kiÓm tra. Chia mÉu trung b×nh lµm 2 phÇn b»ng nhau råi bao gãi phï hîp víi yªu cÇu cña s¶n phÈm. Mét phÇn dïng ®Ó kiÓm tra vµ mét phÇn ®Ó lu vµ b¶o qu¶n trong ®iÒu kiÖn qui ®Þnh mµ mçi lo¹i s¶n phÈm yªu cÇu ®Ó dïng khi ph©n tÝch träng tµi. Trªn mçi gãi mÉu ph¶i cã nh·n ghi râ: Tªn mÉu vµ ®èi tîng c©y trång ®îc sö dông Tªn c¬ së s¶n xuÊt Thêi gian s¶n xuÊt Thêi gian vµ ®Þa ®iÓm lÊy mÉu Tªn ngêi lÊy mÉu, c¬ quan lÊy mÉu. 3.2.4. KiÓm tra: 3.2.4.1. MËt ®é vi sinh vËt kÞ khÝ cè ®Þnh nit¬: 3.2.4.1.1. Pha lo·ng mÉu: a) §èi víi mÉu d¹ng láng: Dïng pipet v« trïng lÊy 10ml mÉu cho vµo 90ml dÞch pha lo·ng ®· chuÈn bÞ s½n (xem 3.2.2.2), tr¸nh ch¹m pipet vµo dÞch pha lo·ng. Trén kü b»ng c¸ch dïng mét pipet v« trïng kh¸c hót lªn xuèng 10 lÇn hoÆc b»ng dông cô trén c¬ häc trong 5-10 gi©y. Dung dÞch t¹o ra ®îc gäi lµ dung dÞch huyÒn phï ban ®Çu. b) §èi víi mÉu d¹ng bét: C©n 10g mÉu cã ®é chÝnh x¸c tíi 0,01g vµ cho vµo 90ml dÞch pha lo·ng ®· chuÈn bÞ s½n (xem 3.2.2.2). Trén kü b»ng dông cô trén c¬ häc tõ 5 ®Õn 10 phót sao cho cã ®îc mét dung dÞch cã ph©n bè ®ång ®Òu, ®Ó l¾ng c¸c phÇn tö nÆng trong kho¶ng 15 phót, g¹n ®îc dung dÞch huyÒn phï ban ®Çu. c) Dïng pipet ®· v« trïng hót 1ml dÞch huyÒn phï ban ®Çu (a hoÆc b) cho vµo 9 ml dÞch pha lo·ng, tr¸nh ch¹m pipet vµo dÞch pha lo·ng. Trén kü b»ng c¸ch dïng mét pipet v« trïng kh¸c hót lªn xuèng 10 lÇn hoÆc b»ng dông cô trén c¬ häc trong 5-10 gi©y, ®Ó cã dÞch pha lo·ng mÉu cã nång ®é lµ 10-2. LÆp l¹i c¸c thao t¸c nµy ®Ó thu ®îc dÞch pha lo·ng ®èi ph©n vi sinh vËt trªn nÒn chÊt mang khö trïng lµ 10-5, 10-6, 10 -7 vµ ®èi víi ph©n vi sinh vËt trªn nÒn chÊt mang kh«ng khö trïng lµ 10-3, 10-4 vµ 10-5. 3.2.4.1. 2. CÊy mÉu: Dïng pipet v« trïng lÊy tõ dÞch mÉu pha lo·ng 10-5, 10-6, 10-7 ®èi víi ph©n vi sinh vËt trªn nÒn chÊt mang khö trïng vµ 10-3, 10-4, 10-5 ®èi ph©n vi sinh vËt trªn nÒn chÊt mang kh«ng khö trïng mét lîng dÞch lµ 0,05 ml (1 giät) cÊy vµo 1 ®Üa petri chøa m«i trêng ®· chuÈn bÞ s½n (xem 3.2.2.1). Mçi mÉu pha lo·ng ®îc cÊy lÆp l¹i trªn 3 ®Üa petri. Dïng que g¹t v« trïng g¹t ®Òu dÞch mÉu trªn bÒ mÆt th¹ch, ®îi kh« vµ óp ngîc hép petri sau ®ã ®a vµo nu«i ë ®iÒu kiÖn kÞ khÝ (*) trong thêi gian vµ nhiÖt ®é thÝch hîp víi tõng lo¹i vi sinh vËt. §Õm sè lîng khuÈn l¹c ®Æc trng cña mÉu gièng vi sinh vËt trªn mçi ®Üa petri. MËt ®é vi sinh vËt trªn mét ®¬n vÞ kiÓm tra (ml) ®îc tÝnh theo c«ng thøc sau: 
Trong ®ã: A: MËt ®é vi sinh vËt cè ®Þnh nit¬ trªn ®¬n vÞ kiÓm tra (g hoÆc ml) a: sè khuÈn l¹c trung b×nh cã trong ®Üa petri d: nång ®é dÞch pha lo·ng
(*): Cã thÓ sö dông mét trong c¸c ph¬ng ph¸p t¹o ®iÒu kiÖn kÞ khÝ sau: - Lo¹i bá «xy b»ng ph¬ng ph¸p vËt lÝ: + Tñ nu«i kÞ khÝ hoÆc + B×nh hót Èm cã vßi hót ch©n kh«ng, hµn kÝn b»ng vad¬lin, kh«ng khÝ trong b×nh ®îc hót ra vµ thay b»ng hçn hîp khÝ CO2, N2, H2 (b×nh ch©n kh«ng). §Ó lo¹i bá «xy mét c¸ch triÖt ®Ó, tríc ®ã nªn ®Æt vµo trong b×nh c¸c cèc ®ùng chÊt hÊp thô «xy nh dithionit, clorua ®ång, iot... Cã thÓ lµm gi¶m t¸c dông cña «xy b»ng c¸ch thªm vµo m«i trêng dinh dìng c¸c chÊt khö «xy nh axit thioglycolic (0,3 ml/l) vµ systein (0,75 g/l). - Lo¹i bá «xy trong kh«ng khÝ b»ng ph¬ng ph¸p ho¸ häc: + B×nh nu«i kÞ khÝ Gas Pak. + Sö dông dung dÞch xanh metylen-NaOH-glucoza: Trén ®Òu 3 dung dÞch víi 1 lîng b»ng nhau (6ml NaOH 10N trong 100ml níc cÊt; 3,0ml xanh metylen 5% trong 100ml níc cÊt vµ 6g glucoza trong 100ml níc cÊt cã bæ sung mét chót thymol kÕt tinh) råi cho vµo èng nghiÖm vµ ®un c¸ch thuû ®Õn mÊt mµu. §Æt èng chØ thÞ nµy vµo thiÕt bÞ nu«i cÊy kÝn. èng chØ thÞ sÏ t¹o ra t×nh tr¹ng yÕm khÝ trong thiÕt bÞ («xy ®îc khö hoµn toµn khi mµu xanh cña dung dÞch chØ thÞ bÞ biÕn mÊt vµ kh«ng t¸i hiÖn trë l¹i). - Nu«i cÊy trong m«i trêng lµm ngËp kÐp: DÞch pha lo·ng mÉu ®îc trén víi m«i trêng th¹ch dinh dìng phï hîp víi tõng lo¹i vi sinh vËt sau khi khö trïng ®· ®Ó nguéi ®Õn 40 - 450C vµ ®æ vµo ®Üa petri. Sau khi th¹ch ®«ng ®æ thªm mét líp th¹ch - níc v« trïng (nguéi ®Õn 40 - 450C). ñ c¸c ®Üa th¹ch ë nhiÖt ®é thÝch hîp. 3.2.4.2. KiÓm tra mËt ®é vi sinh vËt kÞ khÝ ph©n gi¶i xenlulo: 3.2.4.2.1. Pha lo·ng mÉu: Xem 3.2.4.1.1 3.2.4.2.2. CÊy mÉu: Xem 3.2.4.1.2 - Ph¸t hiÖn vßng ph©n gi¶i: Sau khi khuÈn l¹c vi sinh vËt ®· ph¸t triÓn trªn ®Üa petri chøa m«i trêng kiÓm tra, ®Ó ®Üa petri vµo tñ l¹nh trong 12 giê. Sau ®ã cho vµo tñ Êm 400C trong 6 giê. LÊy ra, cho vµo mçi ®Üa petri 5ml thuèc thö lugon, tr¸ng ®Òu kh¾p mÆt th¹ch, ®Ó trong 15 phót råi g¹n bá hÕt thuèc thö lugon ®i. §Õm sè khuÈn l¹c trong ®Üa petri t¹o vßng ph©n gi¶i (vßng trong suèt) bao quanh khuÈn l¹c. - TÝnh to¸n kÕt qu¶: xem 3.2.4.1.2 Phô lôcI. M«i trêng kiÓm tra vi sinh vËt cè ®Þnh nit¬ kÞ khÝ: 1. M«i trêng 1: Níc cÊt 1000ml Glucoza 20,0g K2HPO4 1,0g MgSO4.7H2O 0,5g NaCl vÕt
FeSO4.7H2O vÕt MnSO4.5H2O vÕt CaCO3 40,0g axit ascobic 1,0g E.D.T.A. (Trilon B) 1,0g Th¹ch bét 15,0g 2. M«i trêng2: Níc chiÕt khoai t©y(*) 1000ml Glucoza 20,0g K2HPO4 0,2g MgSO4.7H2O 0,2g Axit ascobic 1,0g CaCO3 3,0g Th¹ch bét 15,0g (*) Níc chiÕt khoai t©y: Khoai t©y: 200,0g Níc cÊt: 500ml Khoai t©y gät vá, c¾t nhá, ®un s«i trong 15 phót, läc trong, bæ sung ®ñ 1000ml II. M«i trêng kiÓm tra vi sinh vËt ph©n gi¶i xenlulo kÞ khÝ:
Níc m¸y 1000ml NaNH4HPO4 1,5g KH2PO4 0,5g NaCl 0,1g K2HPO4 0,5g MgSO4.7H2O 0,4g Pepton 5,0g CaCO3 2,0g Dung dÞch MnSO4.5H2O 1% 1 giät Dung dÞch FeSO4.7H2O 1% 1 giät CMC 20,0g Th¹ch bét 15,0g pH: 7,0-7,4 2. M«i trêng 4: Níc m¸y 500ml Níc thÞt-pepton 500ml CaCO3 2,0g CMC 15,0g Th¹ch bét 15,0g pH: 7,0-7,4
Níc m¸y 900ml Níc chiÕt nÊm men 100ml Glucoza 0,5g Pepton 5,0g CMC 3,0g
Th¹ch bét 15,0g pH: 7,4
Каталог: Documents -> Uploads Uploads -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 8108 : 2009 iso 11285 : 2004 Uploads -> Qcvn 01 -124: 2013/bnnptnt Uploads -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 5624-1 : 2009 Uploads -> Quy ph¹m kh¶o nghiÖm hiÖu lùc thuèc b¶o vÖ thùc vËt Uploads -> Tiªu chuÈn ngµnh Uploads -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 6134 : 2009 Uploads -> TIÊu chuẩn việt nam tcvn 7305-2 : 2008 iso 4427-2 : 2007 Uploads -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 7937-2: 2013 iso 15630-2: 2010 Uploads -> TIÊu chuẩn quốc gia tcvn 7937-1: 2013 iso 15630-1: 2010 Uploads -> Tiªu chuÈn c¬ ®iÖn n ng nghiÖp tcvn 6817: 2001 tải về 61.53 Kb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|