TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiên nguyễn Thị Hải phân lập VI khuẩn khử sulphate (srb) ĐỂ Ứng dụng trong xử LÝ NƯỚc thải axit từ hoạT ĐỘng khai thác khoáng sảN

1.1.1. Sự hình thành AMD……………………………………………………..2

1.1.2. Ảnh hưởng của AMD tới môi trường …………………………………..5

1.1.2.1. Ô nhiễm nguồn nước do AMD……………………….....................5

1.1.2.2. Ô nhiễm đất do AMD………………………………………………6

1.1.2.3. Tình trạng ô nhiễm do AMD ở Việt Nam …………………………8

1.1.2.4. Hiện trạng quản lý và xử lý AMD ở Việt Nam…………………...11

1.2. Xử lý AMD……………………………………………………………………12

1.2.1. Xử lý AMD bằng phương pháp hóa học…………………….................12

1.2.2. Xử lý AMD bằng phương pháp sinh học………………………………13

1.2.2.1. Cơ sở khoa học của công nghệ…………………………………...13

1.2.2.2. Một số quy trình công nghệ xử lý AMD nhờ SRB………………14

1.2.2.3. Các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình xử lý AMD bằng SRB...........16

1.3.1. Phân bố của SRB trong tự nhiên.............................................................19

1.3.2. Đa dạng về di truyền của SRB................................................................20

1.3.3. Đặc điểm sinh lý của SRB......................................................................22

1.3.3.1. Nhu cầu dinh dưỡng của SRB........................................................22

1.3.3.2. Các yếu tố ảnh hưởng tới sinh trưởng của SRB.............................23

1.3.3.3. Cạnh tranh của SRB với các nhóm vi khuẩn khác trong môi trường.........................................................................................................24

Chương 2 – NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.......26

2.1. Nguyên vật liệu……………………………………………………………….26

2.1.1. Các mẫu nước thải……………………………………………………..26

2.1.2. Hóa chất………………………………………………………………..26

2.1.3. Thiết bị, dụng cụ……………………………………………………….26

2.2.1. Làm giàu và phân lập SRB…………………………………………….27

2.2.2. Xác định điều kiện sinh trưởng tối ưu ………………………………...29

2.2.3. Tách DNA tổng số từ mẫu môi trường và chủng thuần khiết.................30

2.2.4. Phương pháp điện di biến tính DGGE....................................................32

2.2.5. Giải trình tự gen 16S rDNA và dựng cây phân loại...............................34

2.2.6. Phân tích hóa học....................................................................................35

2.2.6.1. Định lượng Fe(II) bằng thuốc thử phenanthrolin...................................35

2.2.6.2. Định lượng sulfate……………………………………………………36

2.2.6.3. Xác định nồng độ sulfide……………………………………………..37

2.2.7. Thiết kế mô hình xử lý AMD………………………………………………37

Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………………39

3.1. Làm giàu và phân lập vi khuẩn khử sulfate (SRB) từ các mẫu nước thải............................................................................................................................39

3.2. Vị trí phân loại của ba chủng SRB dựa trên trình tự gen 16S rDNA…….42

3.3. Nghiên cứu đặc điểm sinh học của các chủng SRB mới phân lập………...44

3.3.1. Ảnh hưởng của nồng độ muối trong môi trường………………………45

3.3.2. Ảnh hưởng của pH trong môi trường……………………………….…46

3.3.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy……………………………………...48

3.3.4. Chất cho điện tử và chất nhận điện tử………………………………….48

3.4. Thử nghiệm xử lý AMD trên mô hình phòng thí nghiệm............................50

3.4.1. Xử lý AMD trong điều kiện bổ sung methanol (10 mM) làm cơ chất...51

3.4.2. Xử lý AMD trong điều kiện bổ sung nước thải giàu hữu cơ làm cơ chất....................................................................................................................52

3.4.3. Biến động về thành phần quần xã vi sinh vật trong quá trình xử lý AMD trên mô hình phòng thí nghiệm.........................................................................52