THÔng tin về luận văn thạc sĩ

3. Ngày sinh: 22/04/1983 4. Nơi sinh: Hà Nội

5. Quyết định công nhận học viên cao học: Số: 3619/QĐ-CTSV, ngày 30/12/2012 của Hiệu trưởng Trường Đại học Khoa học Tự nhiên.

6. Các thay đổi trong quá trình đào tạo:

7. Tên đề tài luận văn:

“Phân tích đột biến gen tARN và ND3 của ADN ty thể ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng.”

8. Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm 9. Mã số: 60 42 30

10. Cán bộ hướng dẫn khoa học: PGS.TS. Trịnh Hồng Thái, trường Đại học Khoa học Tự Nhiên.

11. Tóm tắt các kết quả của luận văn:

Ung thư đại trực tràng là một trong các loại ung thư phổ biến nhất, đứng hàng thứ hai sau ung thư phế quản ở nam giới và ung thư vú ở nữ giới. Nghiên cứu ở mức độ phân tử, trong đó có nghiên cứu về đột biến ADN ty thể, đang ngày càng góp phần vào công tác chẩn đoán và điều trị bệnh có hiệu quả. Trong khuôn khổ luận văn này, tác giả đã tiến hành phân tích đột biến điểm A3243G trên gen MT-TL1 mã hóa cho tRNA^{Leu (UUR)} và đột biến A10398G trên gen ND3 của hệ genome ty thể. Nghiên cứu được tiến hành trên 61 cặp mô u và mô lân cận u (cách khối u khoảng 5 cm) của 61 bệnh nhân ung thư đại trực tràng.

Tác giả đã tiến hành tách thành công ADN tổng số từ 61 cặp mô u và mô lân cận u sử dụng kit tách chiết ADN từ mô QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN, Đức). Đoạn gen mang đột biến A3243G và A10398G được khuếch đại bằng phản ứng PCR. Sử dụng phương pháp RFLP, cắt các sản phẩm PCR bằng enzym giới hạn, tác giả đã xác định được tỷ lệ đột biến trong các mẫu tiến hành. Các kết quả đột biến được khẳng định bằng phương pháp giải trình tự.

Ở Việt Nam hiện nay, nghiên cứu đột biến ADN ty thể còn chưa nhiều, số liệu còn hạn chế. Trong luận văn này, tác giả đã lần đầu tiên nghiên cứu đột biến gen tARN và ND3 của genome ty thể trên đối tượng là bệnh nhân ung thư đại trực tràng. Tác giả đã tiến hành phân tích, tìm hiểu mối liên quan giữa đột biến A3243G và A10398G với các đặc điểm lâm sàng của bệnh . Các kết quả thu được cho thấy tỷ lệ đột biến A3243G và phân bố đa hình A10398G không phụ thuộc vào các đặc điểm bệnh học lâm sàng như vị trí mô, tuổi, giới tính, kích thước u, mức độ biệt hóa khối u và giai đoạn ung thư TNM (p>0,05).

12. Khả năng ứng dụng trong thực tiễn: Các kết quả thu được có ý nghĩa trong nghiên cứu cơ bản để tìm ra các dấu chuẩn ADN ty thể, đáp ứng yêu cầu chẩn đoán nhanh và chính xác bệnh ung thư đại trực tràng.

13. Những hướng nghiên cứu tiếp theo:

Một đặc điểm có tính chất đặc thù đối với đột biến ADN ty thể là hiện tượng không đồng nhất của ADN ty thể. Nếu tỷ lệ không đồng nhất trong tế bào và mô cao trên 5% thì các phương pháp PCR-RFLP và nhuộm ethidium bromide cho phép phát hiện đột biến. Tuy nhiên nếu mức độ không đồng nhất thấp thì phương pháp trên khó phát hiện đột biến. Bởi vậy cần áp dụng các phương pháp phân tích định lượng để xác định đột biến, đặc biệt là kỹ thuật PCR định lượng và kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao biến tính (DHPLC).

14. Các công trình đã công bố có liên quan đến luận văn:

3. Date of birth: 22/04/1983 4. Place of birth: Hà Nội

5. Admission decision number: 3619/QĐ-CTSV Dated 30/12/2012

6. Changes in academic process:

7. Official thesis title:

“Analysis of tRNA and ND3 genes mutations of the mitochondrial DNA in colorectal cancer patients”

8. Major: Experimental biology 9. Code: 60 42 30

10. Supervisors: Associate Professor, PhD. Trịnh Hồng Thái, Hanoi university of science.

11. Summary of the finding of the thesis:

Colorectal cancer is one of the most popular forms of cancer and has been increasing tendency on over the world and in Vietnam particularly. The human mitochondrial genome has been completely sequenced and all the mitochondrial encoded genes have been identified and characterized in various types of human cancer, such as colorectal cancer, ovarian cancer, gastric carcinoma, hepatocellular cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, lung cancer, renal cell carcinoma, thyroid cancer… Mutations have been found to be present in both the non-coding region and coding regions of the mtDNA. Several mtDNA mutations have been identified in colon cancer. The mutations were found in regions encoding ND1, ND4L, ND5, Cytochrome b, COXI, COXII and COXIII as well as in the12S and 16S rRNA genes. In this thesis, we investigated the mutations of tRNA and ND3 genes in colorectal cancer patients in Viet Nam to determine whether these mutations are associated with colorectal cancer in Vietnamese patients. The specimens were collected from 61 colorectal cancer patients in Viet Duc and K hospitals. After the pathological examination, the tumor masses were snap frozen and maintained in liquid nitrogen until mitochondrial DNA extraction. The genomic DNA was extracted with QIA amp DNA minikit (Qiagen). Using PCR-RFLP method , the mutations of ND3 genes were determined in CRC patients with mutation level 54%. PCR products were purified using QIAquick Gel Extraction Kit and were sequenced using the same primers that were used for the initial amplification. There was no association between the percentage of genes mutations and the characteristics of CRC patient such as the age, gender, TNM, differentiation and site of tumor (p>0.05).

12. Practical applicability: These results play role in basic research in order to find a potential tumor marker for CRC diagnosis.

13. Further research directions: an important feature of mitochondrial genetics is homoplasmy and heteroplasmy. In simple terms, homoplasmy is when all copies of the mitochondrial genome are identical; heteroplasmy is when there is a mixture of two or more mitochondrial genotypes. The value of these terms is apparent when we consider mtDNA mutations that lead to disease. Some mutations affect all copies of the mitochondrial genome (homoplasmic mutation), whereas others are only present in some copies of the mitochondrial genome (heteroplasmic mutation).

In the presence of heteroplasmy, there is a threshold level of mutation that is important for boththe clinical expression of the disease and for biochemical defects. DNA sequencing fails to detect mutations that may be present at a mutant load level of less than 30%. The further research direction is using Realtime PCR and DHPLC, which can reliably detect as little as 1% mutan to quantify the mitochondrial heteroplasmy level. So we have the capability to detect this mutation at an early stage. the patient can take preventative strategies that may manage or delay the onset of the disease, or even avoid common drugs that may cause thedisorder to worsen.

14. Thesis-related publications: