TRƯỜng đẠi học khoa học tự nhiêN    nguyễn thị ngọc tú phân tích đỘt biến gen tarn và nd3 CỦa adn ty thể Ở BỆnh nhân ung thư ĐẠi trực tràNG

BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT a

DANH MỤC CÁC BẢNG c

DANH MỤC CÁC HÌNH d

MỞ ĐẦU 1

Chương 1- TỔNG QUAN 3

1.1. TY THỂ 3

1.1.1. Hệ genome ty thể 3

1.1.2. Đột biến ADN ty thể và bệnh ty thể 5

1.1.3. Đột biến ADN ty thể và bệnh ung thư 7

1.2. UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG 10

1.2.1. Khái quát về ung thư đại trực tràng 10

1.2.2. Nguyên nhân gây ung thư đại trực tràng 11

1.2.3. Phân loại các dạng ung thư đại trực tràng theo mô học 12

1.2.4. Các phương pháp chẩn đoán ung thư đại trực tràng [20] 15

1.3. ĐỘT BIẾN ADN TY THỂ VÀ BỆNH UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG 16

1.3.1. Đột biến gen tARN của ADN ty thể 17

1.3.2. Đa hình trên gen ND3 của ADN ty thể 18

1.3.3. Các phương pháp phát hiện đột biến gen ty thể giúp chẩn đoán bệnh 21

1.3.4. Tình hình nghiên cứu ở trong nước 23

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 26

2.1. NGUYÊN LIỆU 26

2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 26

2.1.2. Hóa chất 26

2.1.3. Thiết bị 27

2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27

2.2.1. Tách chiết ADN tổng số từ mô 28

2.2.2. Khuếch đại đoạn gen 10398 và đoạn gen 3243 ADN ty thể bằng PCR 29

2.2.3. Phân tích RFLP 30

2.2.4. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR và sản phẩm cắt bằng enzym giới hạn 31

2.2.5. Tinh sạch ADN 35

Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37

3.1. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN ĐIỂM A3243G CỦA GEN tARN TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP 37

3.1.1. Tách chiết ADN tổng số từ mẫu mô ung thư đại trực tràng 37

3.1.2. Kết quả nhân đoạn gen 3243 của ADN ty thể 38

3.1.3. Kết quả phân tích RFLP đoạn gen chứa vị trí 3243 ADN ty thể 38

3.2. KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐA HÌNH A10398G CỦA GEN ND3 ADN TY THỂ BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP 40

3.2.1. Kết quả nhân đoạn gen 10398 của ADN ty thể 40

3.2.2. Kết quả phân tích RFLP đoạn gen mang đa hình A10398G 41

3.2.3. Kết quả giải trình tự đoạn gen mang đột biến A10398G 42

3.2.4. Phân tích mối liên quan giữa đa hình A10398G với các đặc điểm bệnh học lâm sàng của bệnh nhân ung thư đại trực tràng 44

KẾT LUẬN 57

KIẾN NGHỊ 58

TÀI LIỆU THAM KHẢO 59

PHỤ LỤC i

Phụ lục 1. Danh sách bệnh nhân cùng đặc điểm lâm sàng i

Phụ lục 2. Kết quả giải trình tự đoạn 10398 vi