2. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu 2.1. Đối tượng nghiên cứu Các chủng vi nấm nội sinh phân lập từ lá và rễ cây Trang Kandelia candel thu từ
rừng ngập mặn Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí Minh.
2.2. Phương pháp nghiên cứu 2.2.1. Phương pháp thu mẫu và phân lập Mẫu lá và rễ cây Trang K. candel khỏe mạnh, không có biểu hiện bệnh, không quá
già và không quá non được chọn và thu hái từ rừng ngập mặn Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí
Minh vào tháng 10 năm 2015. Mẫu được bảo quản lạnh và vận chuyển về Phòng thí
nghiệm Sinh hóa – Vi sinh, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí
Minh. Sau đó, các mẫu lá cây Trang được khử trùng bề mặt và phân lập vi nấm theo quy
trình đã được công bố (Siriwach et al., 2014).
Các chủng nấm mọc ra từ mẫu lá và rễ được làm thuần và bảo quản dưới lớp dầu
khoáng vô trùng trong bộ sưu tập giống của phòng thí nghiệm. Các chủng nấm được khảo
sát các đặc điểm sinh học cơ bản như hình thái khuẩn lạc, hoạt tính một số enzyme ngoại
bào và hoạt tính kháng khuẩn.
Các chủng nấm này được nuôi trong môi trường MEA (malt extract 30 g, peptone 5
g, agar 20 g, nước cất 1 l) trong điều kiện lắc 150 vòng/phút. Sau 11 ngày, sinh khối và
dịch nuôi được ngâm với dung môi ethyl acetate với tỉ lệ 1:1 và sau đó thu hồi ethyl acetate
để tạo cao ethyl acetate (Ruma, Kumar, & Prakash, 2013).
2.2.2. Phương pháp xác định hoạt tính kháng oxy hóa Cao ethyl acetate của các chủng nấm UP-15, UP-16, UP-17, UP-18 được pha loãng
trong ethanol thành các nồng độ từ 100-1000
g/ml. Mẫu ở các nồng độ nói trên được xác
định năng lực khử (Oyaizu, 1986), khả năng ức chế quá trình peroxide hóa in vitro (Theantana et al., 2012).