Microsoft Word 8 61. 16 Le Thanh Huong doc
PS21 PS22 PS23 PV21 PV22 PV23 PV24 PB03
tải về 3.47 Mb. Chế độ xem pdf
|
Phương-pháp-CTGDPT-2018 (1)
- Điều hướng trang này:
- PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (E) PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M
- 1050 bp 850 bp 600 bp 600 bp 390 bp 390 bp 850 bp 800 bp 1050 bp
| PS21 PS22
PS23 PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PB04 PB05 PB06 (B)
PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (C) PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (D) PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (E) PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (F)
PV21 PV22 PV23 PV24 PB03 PS23 M (G) PS21 PS22 M (H) ITS matK 18S rbcL M (I) rbcL matK ITS 18S M (J)
psbA ITS matK 18S rbcL psbA ITS matK 18S rbcL psbA ITS matK 18S rbcL M -trnH -trnH -trnH 1050 bp 390 bp 600 bp 850 bp 850 bp 600 bp 1050 bp 1050 bp 850 bp 600 bp 600 bp 390 bp 390 bp 850 bp 800 bp 1050 bp Hình 2. Hình ảnh điện di DNA tổng số và sản phẩm PCR khuếch các vùng gen nghiên cứu. (A): Kết quả điện di DNA tổng số các mẫu thực vật chi Nhân sâm. (B)-(F): Kết quả điện di sản phẩm PCR các vùng psbA-trnH, ITS, matK, 18S và rbcL của các mẫu Sâm Ngọc Linh (PV21-24), Sâm vũ diệp (PB03) và Tam thất hoang (PS23). (G): Kết quả điện di sản phẩm PCR vùng gen psbA-trnH của các mẫu Tam thất hoang (PS21, PS22). (H), (I): Kết quả điện di sản phẩm PCR các vùng gen còn lại của các mẫu Tam thất hoang (PS21, PS22). (J): Kết quả điện di sản phẩm PCR 5 vùng gen của các mẫu PB04, PB05, PB06. M: Thang chuẩn DNA 1 kb. Trong 11 mẫu thực vật nghiên cứu, 4 mẫu PV21-24 có độ tương đồng 100% với trình tự các loài Sâm Ngọc Linh, Tam thất và Sâm bắc mỹ ở vùng gen bảo thủ như 18S. Kết quả kiểm tra vùng gen có độ biến đổi cao ITS và psbA-trnH cho thấy 4 mẫu đó có độ tương đồng cao nhất (99,44- 99,62 % và 99,72-100 %) với loài Sâm Ngọc Linh. Kết quả so sánh trên chỉ ra mối quan hệ gần gũi giữa các mẫu PV21-24 với loài Sâm Ngọc Linh. Các mẫu PS21-23, PB03-06 cho độ tương đồng 100% với loài Tam thất hoang ở vùng gen 18S. Kết quả so sánh ở vùng gen biến đổi như ITS cũng cho thấy các mẫu này có độ tương đồng cao nhất với loài Tam thất hoang (từ 99,44 - 99,81 %). Ngoài ra, Tạp chí Công nghệ Sinh học 15(1): 63-72, 2017 69 những vùng gen còn lại cũng chỉ ra quan hệ gần gũi của các mẫu trên với loài này (matK: 99,47 – 100 %, psbA-trnH: 99,43 – 100 %, rbcL: 99,81 - 100 %). Những mẫu PB03-06 với những đặc điểm hình thái được nhận dạng là Sâm Vũ diệp cho kết quả phân tích mã vạch phân tử tương đồng rất cao với loài Tam thất hoang. Quy trình xác định mã vạch phân tử đã được thực hiện lại với mẫu Sâm Vũ diệp PB04 và một mẫu Tam thất hoang mới thuộc cùng khu vực phân bố (kết quả không được trình bày). Tuy nhiên, kết quả vẫn cho thấy trình tự của chúng hoàn toàn tương đồng với trình tự gen này ở các mẫu PB03-06 trước đây và giống với loài Tam thất hoang. Ngoài ra, khi nghiên cứu các vùng gen của loài Sâm Vũ diệp trên GenBank, chúng tôi nhận thấy độ tương đồng rất thấp (93,84 %) giữa 2 trình tự vùng ITS (mã số GenBank là U41679.1 và U41678.1), trong đó 1 trình tự cũng giống với loài Tam thất hoang. Kết quả nghiên cứu tương tự đã được đề cập trong một nghiên cứu trước đây của Wen và Zimmer (1996) về trình tự một số vùng gen của loài Sâm Vũ diệp. Trong nghiên cứu này, vùng gen ITS của Sâm Vũ diệp được xác định có xu hướng giống với các loài nào của chi Nhân sâm thuộc cùng khu vực phân bố trong tự nhiên, cụ thể là P. major, P. omeiensis và P. stipuleanatus. Khả năng cùng nguồn gốc nên Sâm Vũ diệp không được xem là một loài hay một thứ. Cho đến nay, vẫn chưa có công trình nào đưa ra được vùng gen có khả năng phân biệt được Sâm Vũ diệp với các loài khác thuộc chi Nhân sâm. Giá trị trung bình chỉ số biến thiên nucleotide giữa các loài được thể hiện trong Bảng 4. Chỉ số biến thiên của chỉ thị ITS là cao nhất (0,032), tiếp theo lần lượt là psbA-trnH (0,020), matK (0.012), rbcL (0,006) và thấp nhất là 18S (0,001). Như vậy, vùng ITS là vùng mã vạch đa hình nhất trong năm vùng mã vạch được phân tích. Vùng ITS trong DNA ribosome đã được chứng minh là rất hiệu quả trong việc đánh giá mối quan hệ phát sinh giữa các loài trong các nghiên cứu về mã vạch phân tử ở thực vật. Zuo el al., (2011) sau khi nghiên cứu các vùng gen atpF-atpH, psbA-trnH, psbK-psbI, psbM-trnD, matK, rps16, rpoB, rpoC1, rbcL, ITS và nad1 trên quần thể sâm đã chỉ ra rằng vùng gen ITS có mức độ đa dạng di truyền cao nhất, có khả năng phân biệt loài đến 87,5 % và dưới loài đến 84,21 %. Nguyễn Thị Phương Trang et al., (2011) đã phân tích mối quan hệ di truyền của Sâm Ngọc Linh với các loài trong chi Nhân sâm dựa trên kết quả phân tích thông tin di truyền đoạn gen ITS-rDNA. Kết quả cho thấy Sâm Ngọc Linh có mối quan hệ gần gũi với loài Tam thất và chúng khác nhau ở 18 nucleotide. Phan Kế Long el al., (2014) đã tiến hành nghiên cứu đặc điểm di truyền của các mẫu sâm thu ở Lai Châu trên cơ sở phân tích trình tự nucleotide vùng gen matK và ITS-rDNA. Kết quả cho thấy trình tự vùng gen ITS của Sâm Lai Châu khác với Sâm Ngọc Linh từ 04 đến 05 nucleotide, chúng tạo nên nhánh riêng biệt và có mối quan hệ gần gũi với Tam thất gừng. tải về 3.47 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|