Microsoft Word 8 61. 16 Le Thanh Huong doc
tải về 3.47 Mb. Chế độ xem pdf
|
Phương-pháp-CTGDPT-2018 (1)
- Điều hướng trang này:
- Bảng 2.
- Kết quả tách chiết DNA tổng số và nhân dòng các đoạn gen
| Trình tự mồi ( 5’-3’)
Kích thước sản phẩm PCR (bp) 18S_F 18S_R TGCAACAAACCCCGACTTCTGG GGACCTGGTAAGTTTCCCCGTG 1050 ITS_F ITS_R ACGAATTCATGGTCCGGTGAAGTGTTCG TAGAATTCCCCGGTTCGCTCGCCGTTAC 800 matK_F matK_R ACCGTACTTTTATGTTTACGAGC TCCATCTRGAAATMTTRGTTCA 850 psbA-trnH_F psbA-trnH_R ACCCGGTCTTAGTGTATACGAG TTCACTGCCTTGATCCACTTGG 390 rbcL_F rbcL_R GCAAGTGTTGGATTCAAAGCTGGTG TGGTTGTGAGTTCACGTTCT 600 Hình 1. Các mẫu thực vật chi Nhân sâm thu thập được. (A), (B), (C), (D): các mẫu Sâm Ngọc Linh PV21, PV22, PV23, PV24. (E), (F), (G), (H): các mẫu Sâm Vũ diệp PB03, PB04, PB05, PB06. (I), (J), (K): các mẫu Tam thất hoang PS21, PS22, PS23. B C A D E G H F I K J Lê Thanh Hương et al. 66 Bảng 2. Thông tin các loài và trình tự gen đã công bố trên GenBank được phân tích trong nghiên cứu. Tên loài Mã số truy cập GenBank 18S ITS matK psbA-trnH rbcL P. vietnamensis AB033635.1 JF772113.1 AB044906.2 NC_028704.1 NC_028704.1 P. stipuleanatus AB088025.1 U41695.1 AB088015.1 HQ112892.1 HQ112601.1 P. notoginseng D85171.1 U41684.1 AB027527.1 HQ112884.1 JF950030.1 P. ginseng D83275.1 U41680.1 AB044903.2 JX996152.1 JF950029.1 P. japonicus D84100.1 U41702.1 AB044905.2 HQ112881.1 KF208384.1 P. quinquefolius D85172.1 U41687.1 HM142271.1 JX996153.1 HQ112616.1 P. trifolius U41697.1 KM210137.1 HQ112894.1 HQ112614.1 P. pseudoginseng HQ112438.1 AB088016.1 HQ112886.1 KM210153.1 P. zingiberensis AB085764.1 U41700.1 AB088005.1 Phân tích kết quả Trình tự DNA được xử lý và phân tích bằng phần mềm BioEdit, trong đó có so sánh với các trình tự tương ứng của các loài thuộc chi Nhân sâm đã được công bố trên GenBank (Bảng 2). Khoảng cách giữa các trình tự khi so sánh theo cặp nucleotide (Pairwise distance) được xác định sử dụng phần mềm MEGA 6.06. Biểu đồ hình cây về mối quan hệ phát sinh loài được xây dựng theo phương pháp Neighbour-Joining và Maximum-Likelihood với giá trị boostrap là 1000 dựa trên cơ sở các số liệu thu được. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết quả tách chiết DNA tổng số và nhân dòng các đoạn gen Sản phẩm DNA tổng số sau khi tách chiết và tinh chế được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose nồng độ 0,8 %. Có thể nhận thấy rằng các mẫu DNA thu được có chất lượng tốt, trên giếng điện di chỉ xuất hiện một băng DNA có trọng lượng phân tử cao, sắc nét, đảm bảo chất lượng cho các bước nghiên cứu tiếp theo (Hình 2). DNA tổng số của các mẫu sau khi được xác định mức độ hấp thụ tử ngoại (OD) bằng máy đo quang phổ, được pha loãng tới nồng độ cần thiết để làm khuôn cho PCR với các cặp mồi đặc hiệu đã được thiết kế (Bảng 1). Kết quả điện di sản phẩm PCR trên gel agarose 0,8 % cho thấy các cặp mồi 18S, ITS, matK, psbA-trnH và rbcL đã được sử dụng thành công trong việc nhân bản, khuếch đại các đoạn gen mong muốn từ DNA của 11 mẫu thực vật chi Nhân sâm. Các sản phẩm PCR này được tinh sạch sử dụng cho phản ứng xác định trình tự gen (Hình 2). tải về 3.47 Mb. Chia sẻ với bạn bè của bạn:
|