5.4Môi trưỜng nuôi cẤy
Hầu hết các môi trường nuôi cấy thường được làm từ các hóa chất cơ bản hoặc thậm chí có thể mua sẵn từ thị trường. Các môi trường bán sẵn trên thị trường có chất lượng đồng đều hơn môi trường tự chuẩn bị từ các thành phần cơ bản.
Hạn chế sự phát triển của vi khuẩn bằng cách cho thêm một lượng kháng sinh vào môi trường. Hầu hết các loại kháng sinh đều dễ bị biến tính ở điều kiện nhiệt độ cao, chỉ bỏ kháng sinh vào môi trường sau khi hấp khử trùng (trước khi agar kịp đông lại).
|
Penicillin (50 đơn vị / ml), streptomycin (50 đơn vị / ml) và
tetracycline (30 đơn vị / ml) có thể sử dụng riêng hoặc kết hợp.
Chloramphenicol (50 mg / l) có thể hấp khử trùng (cho thẳng vào môi trường trước khi hấp).
|
|
Lượng agar cho vào các môi trường (giới thiệu ở phần dưới) có thể khác nhau tùy thuộc vào nhãn hiệu agar và cơ sở sản xuất. Lượng agar dùng để nấu môi trường phải bảo đảm đủ cứng để có thể cấy vi khuẩn bằng phương pháp vạch que cấy lên môi trường. Nếu phát hiện trong nước máy có chứa chất bẩn hoặc độc tố thì nên sử dụng nước cất thay thế.
Môi trường khoai tây - đường - agar (PDA): Đây là môi trường tốt cho sự phân lập và phát triển của nấm. Rửa sạch khoai tây (không gọt vỏ). Cắt khoai tây thành từng miếng nhỏ và luộc trong khoảng 1 giờ, sau đó lọc khoai tây và nước luộc bằng rây (hoặc vải màn) rồi vứt bỏ phần bã đi. Có thể dùng máy xay sinh tố để xay nát hỗn hợp. Hòa tan đường dextrose (glucose) và agar vào 1 lít nước máy cùng với nước lọc khoai tây. Hấp khử trùng ở 121C trong 20 phút.
|
|
Môi trường PDA
|
|
|
Khoai tây
|
200 g
|
Dextrose (glucose)
|
20 g
|
Agar
|
20 g
|
Nước máy
|
1 lit
|
|
|
Công thức này có thể được thay đổi một chút bằng cách dùng các loại rau và ngũ cốc khác thay thế khoai tây. Có thể giảm ¼ hoặc ½ lượng khoai tây và lượng đường tùy thuộc yêu cầu sử dụng.
Môi trường agar - nước máy (TWA): Đây là môi trường phổ biến để phân lập rất nhiều loài nấm. Có thể tiệt trùng cọng lúa hoặc hạt ngũ cốc rồi đặt lên môi trường để kích thích nấm sản sinh bào tử. Trộn agar trong nước và hấp ở 121C trong 20 phút.
|
|
Môi trường TWA
|
|
|
Agar
|
20 g
|
Nước máy
|
1 lit
|
|
|
Môi trường nước quả V-8 - agar (V-8J): Đây là môi trường tốt cho sự phát triển của nấm, đặc biệt là Phytophthora. Lọc qua nước V-8 trước khi sử dụng. Trộn các thành phần vào nhau và hấp khử trùng ở 121C trong 20 phút. Nếu không có nước V-8 có thể thay thế bằng nước sinh tố cà chua, cà rốt, cần tây lớn…
|
|
Môi trường V-8J
|
|
|
Nước V-8 đã lọc
|
200 ml
|
CaCO3
|
3 g
|
Agar
|
20 g
|
Nước cất
|
800 ml
|
|
|
Môi trường King B - agar (KBA): Đây là môi trường tốt để phân lập vi khuẩn hại nói chung và đặc biệt là pseudomonads huỳnh quang và Erwinia spp. Điều chỉnh pH đến 7,2 và hấp khử trùng ở 121C trong 25 phút.
|
|
Môi trường KBA
|
|
|
Proteose peptone
|
20 g
|
Glycerol
|
10 g
|
K2HPO4 (khan)
|
1,5 g
|
MgSO4.7H2O
|
1,5 g
|
Agar
|
15 g
|
Nước cất
|
1 lit
|
|
|
Môi trường Nutrient agar (NA): Là môi trường thường được sử dụng để nuôi cấy vi khuẩn. Điều chỉnh pH đến 7,4 và hấp khử trùng ở 121C trong 15 phút.
|
|
Môi trường NA
|
|
|
Chất chiết nấm men
|
3 g
|
Peptone
|
5 g
|
NaCl
|
5 g
|
Agar
|
15 g
|
Nước cất
|
1 lit
|
|
|
Môi trường Sucrose peptone agar (SPA): Là môi trường thích hợp cho sự phát triển của nhiều loại vi khuẩn, có thể sử dụng để phân lập vi khuẩn hại. Điều chỉnh pH 7,2 – 7,4 và hấp khử trùng ở 121C trong 15 phút.
|
|
Môi trường SPA
|
|
|
Sucrose
|
20 g
|
Peptone
|
5 g
|
K2HPO4 (khan)
|
0,5 g
|
MgSO4.7H2O
|
0,25 g
|
Agar
|
12 g
|
Nước cất
|
1 lit
|
|
|
: Là môi trường tốt để phân lập và nuôi cấy nhiều loại nấm sợi và nấm men. Có thể sử dụng lượng mạch nha khác nhau. Hấp khử trùng ở 121C trong 20 phút.
|
|
Môi trường MEA
|
|
|
Malt extract (mạch nha)
|
2 – 20 g
|
Agar
|
20 g
|
Nước cất
|
1 lit
|
|
|
Môi trường Glycerol agar (GA): Được sử dụng để bảo quản mẫu phân lập làm tiêu bản khô. Hấp khử trùng ở 121C trong 20 phút. Tản nấm phát triển trên môi trường agar chưa khô hoàn toàn được đặt lên môi trường GA (đổ vào một nắp đĩa Petri). Để đĩa khô trong 2-3 ngày. Lớp môi trường GA khô mềm, dẻo hơn hầu hết các môi trường agar khác.
|
|
Môi trường GA
|
|
|
Glycerol
|
25 ml
|
Agar
|
20 g
|
Nước máy
|
1 lit
|
|
|
Chia sẻ với bạn bè của bạn: |